| 小反刍兽疫病毒芯片式数字PCR检测方法的建立及应用 |
| |
| 引用本文： | 杨鸣发,马云云,于志亚,刘家森,康洪涛,姜骞,曲连东.小反刍兽疫病毒芯片式数字PCR检测方法的建立及应用[J].中国动物检疫,2021,38(12):91-98. |
| |
| 作者姓名： | 杨鸣发 马云云 于志亚 刘家森 康洪涛 姜骞 曲连东 |
| |
| 基金项目： | 国家重点研发计划项目（2017YFD0501800） |
| |
| 摘 要： | 为建立一种准确、快速、敏感性更高的小反刍兽疫病毒（peste des petits ruminants virus，PPRV）检测方法，建立了一种芯片式数字PCR（cdPCR）检测方法。根据GenBank中公布的PPRV Nigeria75 /1疫苗株N基因序列设计1对引物，PCR扩增大小为166 bp片段，构建pMDTM18-N标准质粒并优化反应条件，建立了PPRV N基因cdPCR检测方法，并与实时荧光定量 PCR（RT-qPCR）检测方法的灵敏性、重复性、特异性和临床样品检测做了比较分析。结果显示：当质粒标准品浓度在1.22×（105~102）copies/μL范围时，cdPCR检测方法比普通RT-PCR灵敏度高1 000倍，且稳定性好，特异性强；当标准品浓度在1.22×（105~10-3）copies/μL范围时，cdPCR与RT-qPCR相比具有相同的特异性，但灵敏性比RT-qPCR高100倍；与RT-qPCR 测定结果（13.29±6.74）copies/μL相比，cdPCR的最低检测限更低，约为（0.44±0.14）copies/μL；cdPCR对47份临床样本的PPRV核酸阳性检出率（25.5%）高于RT-qPCR（17.0%）。结果表明，建立的cdPCR方法特异性强、灵敏度高、重复性好，为预防PPR早期流行提供了一种快速有效的诊断和定量检测方法。
|
| 关 键 词： | 小反刍兽疫病毒（PPRV） 芯片式数字PCR（cdPCR） 实时荧光定量PCR（RT-qPCR） |
Development and Application of a Chip Digital PCR Assay for PPRV |
| |
| Yang Mingf,Ma Yunyun,Yu Zhiy,Liu Jiasen,Kang Hongtao,Jiang Qian,Qu Liandong.Development and Application of a Chip Digital PCR Assay for PPRV[J].China Journal Of Animal Quarantine,2021,38(12):91-98. |
| |
| Authors: | Yang Mingf Ma Yunyun Yu Zhiy Liu Jiasen Kang Hongtao Jiang Qian Qu Liandong |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | |
|
| 点击此处可从《中国动物检疫》浏览原始摘要信息 |
| 点击此处可从《中国动物检疫》下载免费的PDF全文 |
