| 猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白特异性纳米抗体的原核表达及鉴定 |
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| 引用本文： | 王鑫,张洪亮,秦志华,郑乾坤,黄娟,董绍明,杨瑞梅,曲光刚,单虎.猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白特异性纳米抗体的原核表达及鉴定[J].中国动物检疫,2023(10):106-111. |
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| 作者姓名： | 王鑫 张洪亮 秦志华 郑乾坤 黄娟 董绍明 杨瑞梅 曲光刚 单虎 |
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| 作者单位： | 1. 山东省预防兽医学重点实验室青岛农业大学动物医学院;2. 山东省滨州畜牧兽医研究院;3. 得利斯集团有限公司 |
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| 摘 要： | 为获得针对猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）GP5蛋白的特异性纳米抗体,并鉴定其抗原结合活性,以本实验室前期获得的PRRSV GP5蛋白特异性纳米抗体VHHGP5基因片段为模板,使用PCR对目的片段进行扩增,将扩增的片段经双酶切处理后连接到pColdSUMO-FLAG载体上,随后转化至E.coli TOP 10感受态细胞。经菌液PCR鉴定,将构建成功的重组质粒转化至E.coli BL21 （DE3）感受态细胞,用IPTG作为诱导剂对目的蛋白进行诱导表达,表达产物通过Ni-NTA亲和层析柱纯化。通过SDA-PAGE凝胶电泳分析表达及纯化后的蛋白,同时使用ELISA方法检测纯化后的纳米抗体效价,并使用Western blot鉴定纯化后的蛋白。SDS-PAGE结果显示,成功获得了大小约36 kDa的重组蛋白,利用原核表达系统制备的PRRSV GP5特异性纳米抗体重组蛋白以可溶性形式表达;ELISA结果显示,该纳米抗体结合抗原的效价为1:50 000;Western blot结果显示,该纳...
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| 关 键 词： | 猪繁殖与呼吸综合征病毒 GP5蛋白 大肠杆菌表达系统 纳米抗体 |
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