| 正交优化设计蒙药阿给ISSR-PCR反应体系 |
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| 引用本文： | 王真,刘越,孙辉,游光霞,孙洪波,申刚义,黄雪涛,毛珂,段福宇,谢龙生,蒋武霖,冯金朝,黄璐琦.正交优化设计蒙药阿给ISSR-PCR反应体系[J].安徽农业科学,2010,38(15):7779-7781. |
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| 作者姓名： | 王真 刘越 孙辉 游光霞 孙洪波 申刚义 黄雪涛 毛珂 段福宇 谢龙生 蒋武霖 冯金朝 黄璐琦 |
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| 作者单位： | 中央民族大学生命与环境科学学院,北京,100081;中央民族大学生命与环境科学学院,北京,100081;中国中医科学院中药研究所,北京,100700;中国农业科学院作物科学研究所,北京,100081;北京市农林科学院北京杂交小麦工程技术研究中心,北京,100097;中国农业科学院作物科学研究所,北京,100081;中央民族大学中国少数民族传统医学研究院,北京,100081;中国中医科学院中药研究所,北京,100700 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目，高等学校学科创新引智计划项目，中央民族大学"985"工程项目，中央民族大学青年教师科研基金项目，国家大学生创新性实验计划项目 |
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| 摘 要： | 目的]建立适用于蒙药阿给（Artemisia frigidaWilld.）的ISSR反应体系,为ISSR标记技术在蒙药阿给遗传多样性研究中的应用奠定技术基础。方法]利用正交试验设计,从Mg^2＋、dNTP、TaqDNA聚合酶和引物浓度4因素3水平,对蒙药阿给ISSR-PCR反应体系进行优化分析,并在此基础上对PCR的循环次数及退火温度进行试验。结果]在20μl反应体系中,Mg^2＋为1.5mmol/L,dNTP为0.25mmol/L,TaqDNA聚合酶为1.5U,引物为0.75μmol/L时,且ISSR最适的循环次数为40,最适退火温度为56.0℃,扩增效果最好。结论]筛选出的反应体系适用于蒙药阿给的ISSR扩增。
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| 关 键 词： | 阿给 正交设计 ISSR-PCR 反应体系 |
Optimization for ISSR-PCR Reaction System on Artemisia frigida Willd. Using Orthogonal Design |
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| Institution: | WANG Zhen et al(College of Life and Environmental Sciences,Minzu University of China,Beijing 100081) |
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| Abstract: | Objective]The aim was to establish a suitable ISSR reaction system for Astemisia frigida Willd.,and lay a foundation for the application of ISSR technique in A.frigida genetic diversity study.Method]The orthogonal design was used to optimize the ISSR-PCR amplification system of A.frigida in four factors at three levels respectively.Then,based on the optimal ISSR-PCR amplification system,the cycle number and annealing temperature were also proposed.Result]The results showed that in 20 μl amplification system,there were 1.5 mmol/L Mg2+,0.25 mmol/L dNTP,1.5 U Taq DNA polymerase and 0.75 μmol/L primers.The optimal cycle number and annealing temperature respectively were 40 and 56.0 ℃.Conclusion]The screening reaction system is suitable for A.frigida ISSR amplification. |
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| Keywords: | ISSR-PCR |
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