| Luman-端融合蛋白单克隆抗体的制备 |
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| 引用本文： | 兰向莉,李 晓,马延森.Luman-端融合蛋白单克隆抗体的制备[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2013,41(2):1-6. |
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| 作者姓名： | 兰向莉 李 晓 马延森 |
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| 作者单位： | 西北农林科技大学 动物医学院，农业部动物生物技术重点实验室;西北农林科技大学 动物医学院，农业部动物生物技术重点实验室;西北农林科技大学 动物医学院，农业部动物生物技术重点实验室 |
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| 基金项目： | 高等学校博士点学科专项科研基金项目(20110204120010) |
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| 摘 要： | 【目的】制备小鼠抗Luman-N端融合蛋白单克隆抗体。【方法】将GST-Luman-N端载体转化大肠杆菌BL21,用IPTG进行诱导表达,并进行SDS-PAGE电泳,用电洗脱的方法纯化融合蛋白;以纯化的融合蛋白为抗原免疫BALB/C小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,利用间接ELISA方法筛选阳性孔,采用有限稀释法进行亚克隆,筛选具有抗体分泌活性的单克隆细胞株;应用Western Blot、间接ELISA等方法进行克隆株稳定性、抗体特性的鉴定。【结果】获得1株能稳定分泌抗Luman-N端融合蛋白特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株(2C8),其腹水ELISA单抗效价为1∶1×107。亚型鉴定和亲和力常数分析表明,2C8产生的单克隆抗体亚型为IgG2b型,其亲和力常数约为1×107。Western Blot分析证明,该株单抗能与原核表达的Luman-N端融合蛋白特异性结合,与GST-LRF-N端融合蛋白没有特异性结合。染色体分析结果表明,2C8细胞株染色体数目为(53±2)对。【结论】获得了抗Luman-N端融合蛋白的抗体,该抗体具有良好的特异性和结合活性,可用于对Luman-N端蛋白的进一步研究。
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| 关 键 词： | Luman-N端融合蛋白 间接ELISA 单克隆抗体 |
| 收稿时间： | 2012/5/24 0:00:00 |
Preparation and identification of monoclonal antibodies against Luman-N-term fusion |
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| LAN Xiang-li,LI Xiao,MA Yan-sen,JIN Ya-ping.Preparation and identification of monoclonal antibodies against Luman-N-term fusion[J].Journal of Northwest Sci-Tech Univ of Agr and,2013,41(2):1-6. |
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| Authors: | LAN Xiang-li LI Xiao MA Yan-sen JIN Ya-ping |
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| Institution: | (Animal Biotechnology Key Laboratory of Ministry of Agriculture,College of Animal Medicine, Northwest A&F University,Yangling,Shaanxi 712100,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Luman-N-term fusion protein indirect ELISA monoclonal antibody(McAb) |
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