| 猪流行性腹泻病毒解旋酶Nsp13表达纯化及其RNA解旋活性鉴定 |
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| 引用本文： | 沈熹涓,姬晶晶,金慧琴,李宇哲,刘斐,单衍可.猪流行性腹泻病毒解旋酶Nsp13表达纯化及其RNA解旋活性鉴定[J].畜牧与兽医,2024(1):33-38. |
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| 作者姓名： | 沈熹涓 姬晶晶 金慧琴 李宇哲 刘斐 单衍可 |
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| 作者单位： | 南京农业大学动物医学院 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金青年基金项目(32000028)；;中国博士后基金面上基金项目(2020M681649)；;江苏省博士后科研资助项目(2020Z120)； |
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| 摘 要： | 旨在可溶性表达并纯化猪流行性腹泻病毒(PEDV)解旋酶Nsp13,并验证表达纯化得到的PEDV Nsp13蛋白具有RNA解旋活性。将pET28a(+)-PEDV Nsp13重组质粒转化到大肠杆菌Transetta (DE3)感受态细胞中，利用终浓度0.5 mmol/L的IPTG在18℃条件下诱导16 h,收集诱导后的菌体，超声破碎并收集其上清液，通过镍亲和层析技术获得纯化后的PEDV Nsp13;设计RNA底物，并建立体外解旋反应体系，验证蛋白的RNA解旋活性，并在相同时间内探究不同温度条件下PEDV Nsp13蛋白对RNA的解旋情况，进一步验证其活性。结果表明，在大肠杆菌系统中可溶性表达了PEDV Nsp13蛋白，纯化后蛋白浓度可达0.9 mg/mL;通过体外解旋试验，验证了PEDV Nsp13蛋白具有ATP依赖的RNA解旋酶活性，并发现PEDV Nsp13蛋白的RNA解旋酶活性在一定范围内随解旋温度的升高而提高。本研究结果为进一步深入研究PEDV Nsp13的RNA解旋作用机制奠定了基础。
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| 关 键 词： | PEDV Nsp13 可溶性表达 蛋白纯化 RNA解旋活性 |
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