| 禽腺病毒4型Penton和Fiber1蛋白原核表达及多克隆抗体的制备 |
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| 引用本文： | 方天,李乔斌,冯孝傲,朱二鹏,陈常秀,程振涛.禽腺病毒4型Penton和Fiber1蛋白原核表达及多克隆抗体的制备[J].畜牧与兽医,2024(3):54-61. |
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| 作者姓名： | 方天 李乔斌 冯孝傲 朱二鹏 陈常秀 程振涛 |
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| 作者单位： | 1. 贵州大学动物科学学院;2. 贵州省动物疫病与兽医公共卫生重点实验室;3. 贵州省动物疾病预防控制中心 |
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| 基金项目： | 贵州省科技计划项目(黔科合基础[2020]1Y409号)；;贵州省优秀青年科技人才项目(黔科合平台人才[2021]5646)； |
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| 摘 要： | 为开展禽腺病毒4型(FAdV-4)五邻体蛋白(Penton)和纤丝蛋白(Fiber1)多克隆抗体的制备及评价，研究通过对Penton和Fiber1基因优势抗原表位基因片段进行生物信息学分析，设计特异性引物PCR扩增获得Penton和Fiber1优势抗原表位基因片段，将其克隆至原核表达载体pColdⅠ,转入表达宿主菌BL21(DE3)进行异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达，将纯化、鉴定后的目的蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体，对抗体进行Western blot鉴定及间接ELISA抗体效价测定。结果可见，FAdV-4 Penton基因序列共编码525个氨基酸，Fiber1基因序列共编码432个氨基酸，其优势抗原表位点分别有7、6个区域，且均集中于N端；成功构建pColdⅠ-P和pColdⅠ-F1重组原核表达质粒，其诱导表达的重组蛋白Penton和Fiber1均与His标签单抗发生特异性反应，动物免疫获得的Penton、Fiber1多克隆抗体均能与目的蛋白反应形成特异性条带，且Penton多克隆抗体效价高于Fiber1多克隆抗体。综上，研究获得的纯化重组蛋白Penton较Fiber...
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| 关 键 词： | 禽腺病毒4型 Penton蛋白 Fiber1蛋白 生物信息学分析 多克隆抗体 |
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