含E.coli F因子的马立克氏病病毒1型(MDVI)转移载体的构建及初步应用 |
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引用本文: | 邱亚峰,葛菲菲,陈溥言.含E.coli F因子的马立克氏病病毒1型(MDVI)转移载体的构建及初步应用[J].中国农业科学,2006,39(11):2341-2346. |
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作者姓名: | 邱亚峰 葛菲菲 陈溥言 |
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作者单位: | 南京农业大学动物医学院动物疫病诊断与免疫重点实验室,南京210095 |
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基金项目: | 国家863高新技术发展项目(2002AA245051) |
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摘 要: | 【目的】为了构建MDVI细菌人工染色体,以便快速有效地进行重组病毒的筛选,进行了含EcoliF因子的马立克氏病病毒I型(MDVI)转移载体的构建。【方法】利用DNA重组技术,构建了含有EcoliF因子的马立克氏病病毒I型(MDVI)转移载体,利用脂质体,将线性化的转移载体转染入已感染CVI988病毒的CEF,用Mx—HAT药物筛选3代以后,用x—gal染色,挑取阳性克隆。【结果】经测序分析发现,人工体外合成的单一loxP位点,序列正确,另外,同源重组左臂和右臂序列正确,并且相对连接。利用SphI和NheI双酶切,鉴定出含有同向LoxP位点的转移载体,将其命名为pUS—BGS。将该载体用NheI线性化后,用脂质体转染已感染cVI988病毒的CEF,用MX—HAT药物筛选3代以后,x—gaI染色,可以观察到呈现蓝色的重组病毒。【结论】本研究报道了含有Ecol/F因子以及两同向的loxP位点的MDVI转移载体的构建,利用该载体可以有效地进行重组病毒的筛选,为下一步MDVI细菌人工染色体的构建奠定了基础。
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关 键 词: | 马立克氏病病毒 细菌人工染色体 F因子 |
收稿时间: | 2005-07-03 |
修稿时间: | 2005-07-032006-05-12 |
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