基于Taqman-MGB探针的猪瘟病毒野毒株荧光RT-PCR检测方法的研究 |
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引用本文: | 温国元,杨峻,罗青平,廖永洪,胡智斌,张蓉蓉,王红琳,艾地云,罗玲,宋念华,邵华斌.基于Taqman-MGB探针的猪瘟病毒野毒株荧光RT-PCR检测方法的研究[J].中国猪业,2013(Z2):136-140. |
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作者姓名: | 温国元 杨峻 罗青平 廖永洪 胡智斌 张蓉蓉 王红琳 艾地云 罗玲 宋念华 邵华斌 |
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作者单位: | 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所;动物胚胎与分子育种湖北省重点实验室;湖北省动物疫病预防控制中心 |
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摘 要: | 应用MGB荧光RT-PCR技术对猪瘟病毒野毒株进行实时定量检测,以实现对猪瘟病毒野毒株与疫苗株的鉴别诊断。以猪瘟病毒5’端非编码区为扩增靶区,通过鉴别诊断位点的筛选、引物、探针和反应条件的优化,建立了猪瘟病毒野毒株荧光RT-PCR检测方法。试验结果表明,该方法的检测灵敏度为10拷贝/反应或3.0 TCID50/反应;对猪瘟病毒野毒株的检测结果均为阳性,而对猪瘟病毒疫苗株和其他猪源病毒的检测结果均为阴性,表明该方法具有较好的特异性;对515份临床样品的检测结果表明,该方法与RT-nPCR测序法的检测符合率为98.3%;猪瘟病毒人工感染猪实验结果表明,猪瘟野毒感染猪发病前2-4天即可被检测出阳性,疫苗免疫株检测结果始终为阴性。
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关 键 词: | 猪瘟病毒 野毒株 荧光RT-PCR |
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