| CRISPR/Cas9体外酶切检测猪生长抑素基因定点修饰靶点活性的研究 |
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| 引用本文： | 李晓敏,任红艳,毕延震,刘西梅,郑新民,吴民耀.CRISPR/Cas9体外酶切检测猪生长抑素基因定点修饰靶点活性的研究[J].中国畜牧兽医,2016,43(1):31-38. |
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| 作者姓名： | 李晓敏 任红艳 毕延震 刘西梅 郑新民 吴民耀 |
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| 作者单位： | 1. 陕西师范大学生命科学学院, 西安 710119;2. 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所, 动物胚胎工程与分子育种湖北省重点实验室, 武汉 430064 |
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| 基金项目： | 国家转基因生物新品种培育重大专项(2014ZX08010-003、2014ZX08006-003);湖北省农业科技创新中心课题(2011-620-001-003);湖北省农业科学院青年基金(2014NKYJJ02) |
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| 摘 要： | 本试验旨在通过CRISPR/Cas9体外酶切法检测猪生长抑素(SST)基因定点修饰靶点的活性。试验设计5个长20 bp的单链导向RNA(sgRNA),即SST-sgRNA-g1、SST-sgRNA-g2、SST-sgRNA-g3、SST-sgRNA-g4和SST-sgRNA-g5。化学合成sgRNA寡核苷酸序列,将寡核苷酸序列连接到可同时表达Cas9和sgRNA的质粒中,挑选正确克隆的质粒作为模板进行体外转录形成SST-sgRNA。利用CRISPR/Cas9体外酶切含靶点的DNA片段,根据酶切条带的灰度换算成sgRNA活性。结果显示目的sgRNA寡核苷酸双链成功插入到质粒中且序列正确,以质粒为模板体外转录SST-sgRNA成功。靶位点经Cas9蛋白酶切后与标准sgRNA1和sgRNA2酶切活性作比较,确定靶点SST-sgRNA-g1、SST-sgRNA-g4和SST-sgRNA-g5活性较高,可为在细胞水平、胚胎水平做基因定点修饰提供依据。
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| 关 键 词： | 猪 生长抑素基因 Cas9酶 单链导向RNA(sgRNA) 体外转录 |
| 收稿时间： | 2015-07-24 |
Study on Detection of Pig SST Gene Site-directed Modification Activity by CRISPR/Cas9 System in vitro |
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| LI Xiao-min,REN Hong-yan,BI Yan-zhen,LIU Xi-mei,ZHENG Xin-min,WU Min-yao.Study on Detection of Pig SST Gene Site-directed Modification Activity by CRISPR/Cas9 System in vitro[J].China Animal Husbandry & Veterinary Medicine,2016,43(1):31-38. |
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| Authors: | LI Xiao-min REN Hong-yan BI Yan-zhen LIU Xi-mei ZHENG Xin-min WU Min-yao |
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| Institution: | 1. College of Life Sciences, Shaanxi Normal University, Xi'an 710119, China;2. Key Laboratory of Animal Embryo Engineering and Molecular Breeding of Hubei Province, Institute of Animal and Veterinary Sciences, Hubei Academy of Agricultural Sciences, Wuhan 430064, China |
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