| 应用竞争PCR定量检测猪IFN-γmRNA |
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| 引用本文： | 郭海龙,童光志,仇华吉,周艳君,兰文生,王云峰,吴东来.应用竞争PCR定量检测猪IFN-γmRNA[J].中国兽医学报,2003,23(3):278-280. |
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| 作者姓名： | 郭海龙 童光志 仇华吉 周艳君 兰文生 王云峰 吴东来 |
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| 作者单位： | 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江,哈尔滨,150001 |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展规划(973)资助项目(G1999011902) |
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| 摘 要： | 运用RT-PCR从经ConA体外刺激培养的猪外周血单核细胞(PBMC)提取的细胞总RNA中扩增猪γ-干扰素(IFN-γ)的部分片段,经酶切鉴定后双酶切缺失中间一小片段,将余下的2个较大片段连接,并用相同的引物在相同条件下扩增连接产物,从而获得截短的同源性片段.将其纯化后克隆于pMD18-T载体,重组质粒经酶切和PCR鉴定后进行序列测定,验证无误后作为竞争性模板内对照,一定比例稀释后分别与等体积经刺激培养的PBMC总RNA反转录产物进行PCR,产物电泳后经扫描分析获得各目标条带与竞争条带的溴化乙锭(EB)嵌入光密度值(IOD),经校正后取上述两者比值的对数值作为Y轴,取已知竞争模板相应浓度的对数值作为X轴,绘制成竞争曲线.应用建立的竞争PCR对不同样品重复试验表明,本方法操作简单,结果可靠,稳定性高,适用于猪IFN-γ mRNA的定量检测.
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| 关 键 词： | 猪IFN-γ 竞争PCR 内对照 嵌入光密度 |
| 文章编号： | 1005-4545(2003)03-0278-03 |
| 修稿时间： | 2002年2月8日 |
Quantitative detection of porcine IFN-γ mRNA by competitive PCR |
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| GUO Hai long,TONG Guang zhi ,QIU Hua ji,ZHOU Yan jun,LAN Wen sheng,WANG Yun feng,WU Dong LAI.Quantitative detection of porcine IFN-γ mRNA by competitive PCR[J].Chinese Journal of Veterinary Science,2003,23(3):278-280. |
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| Authors: | GUO Hai long TONG Guang zhi QIU Hua ji ZHOU Yan jun LAN Wen sheng WANG Yun feng WU Dong LAI |
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| Institution: | GUO Hai long,TONG Guang zhi *,QIU Hua ji,ZHOU Yan jun,LAN Wen sheng,WANG Yun feng,WU Dong LAI |
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