| 利用酵母双杂交系统筛选与猪2型链球菌透明质酸酶(HYL)相互作用的蛋白质 |
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| 引用本文： | 吴涛,常海涛,谭臣,付婷,司有辉,贝为成,陈焕春.利用酵母双杂交系统筛选与猪2型链球菌透明质酸酶(HYL)相互作用的蛋白质[J].中国兽医学报,2009,29(9). |
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| 作者姓名： | 吴涛 常海涛 谭臣 付婷 司有辉 贝为成 陈焕春 |
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| 作者单位： | 吴涛(华中农业大学农业微生物国家重点实验室,湖北,武汉,430070;武汉工业学院饲料科学系,湖北,武汉,430023);常海涛,谭臣,付婷,司有辉,贝为成,陈焕春(华中农业大学农业微生物国家重点实验室,湖北,武汉,430070) |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展计划("973"计划)资助项目 |
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| 摘 要： | 以猪链球菌2型(SS2)透明质酸酶(HYL)作为诱饵蛋白,利用CytoTrap酵母双杂交系统,从人的肺组织cD-NA文库中筛选与HYL相互作用的蛋白,探索HYL在SS2致病中的作用.首先,通过PCR扩增SS2 Hyl全长基因,定向克隆到pSos载体多克隆位点中,构建诱饵载体(pSos-Hyl).同时,将Hyl克隆到pET-28c载体中,构建重组表达栽体(pET28c-Hyl).将pSos-Hyl和人肺cDNA文库(pMyr-cDNA)共转化cdc25H酵母细胞,筛选与HYL相互作用的阳性克隆.经过筛选和重复验证,并时所得到的栽体插入片段进行测序,经BLAST分析,从人肺组织cDNA文库中得到2个与HYL相互作用的阳性克隆,2个基因分别与γ内收蛋白(Homo sapiens adducin 3(gam-ma)(NT-030059.12),ADD3)和装配架离子转运蛋白(Homo sapiens chromosome 6 genomic contig,reference as-sembly ion transporter protein(NT_034880.3),AITP)基因的同源性为99%和100%.将HYL原核表达,ADD3和AITP真核细胞表达后,用免疫共沉淀试验分别验证了HYL与ADD3和AITP之间的相互作用,为进一步研究ADD3和AITP可能与SS2致病的关系奠定了前期基础.
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| 关 键 词： | 猪链球菌2型 透明质酸酶 酵母双杂交 γ内收蛋白 装配架离子转运蛋白 |
Screening for new binding proteins which interact with HYL of Streptocuccus suis serotype 2 using yeast two hybrid |
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