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| 泛素相关修饰蛋白SUMO-2对RAW264.7细胞内布鲁氏菌16M存活的影响 | |
| 引用本文： | 邓肖玉,易继海,李启峰,何金科,杨琴,王月丽,王震,王勇,陈创夫.泛素相关修饰蛋白SUMO-2对RAW264.7细胞内布鲁氏菌16M存活的影响[J].中国畜牧兽医,2019,46(8):2257-2264. |
| 作者姓名： | 邓肖玉 易继海 李启峰 何金科 杨琴 王月丽 王震 王勇 陈创夫 |
| 作者单位： | 1. 石河子大学动物科技学院, 石河子 832000; 2. 石河子大学生命科学学院, 石河子 832000 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金项目（U1803236）；兵团重大科技项目（2017AA003） |
| 摘 要： | 为探究泛素相关修饰蛋白SUMO-2对布鲁氏菌16M的影响，本试验构建了SUMO-2基因干扰和过表达小鼠巨噬细胞RAW264.7模型，并用布鲁氏菌16M进行侵染。参照GenBank中SUMO-2基因序列设计特异性干扰片段和过表达引物，克隆成功后连接至相应的慢病毒载体，转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，选取阳性克隆菌提取质粒转染HEK-293FT细胞，将重组的慢病毒感染小鼠巨噬细胞RAW264.7，利用布鲁氏菌16M分别侵染构建成功的干扰和过表达细胞模型。通过实时荧光定量PCR检测SUMO-2 mRNA的转录水平，Western blotting检测SUMO-2蛋白的表达，ELISA检测IFN-γ和TNF-α水平，菌落计数来确定布鲁氏菌在细胞中的存活能力。结果显示，与对照组相比，干扰组SUMO-2 mRNA水平极显著降低（P<0.01），过表达组SUMO-2 mRNA水平极显著升高（P<0.01），成功构建了SUMO-2干扰和过表达细胞模型。Western blotting结果显示，布鲁氏菌16M感染能以时间依赖的方式下调SUMO-2蛋白的表达。经菌落计数后发现，SUMO-2过表达后布鲁氏菌的数量极显著减少（P<0.01），抑制布鲁氏菌16M的细胞内繁殖。而SUMO-2干扰后布鲁氏菌的数量显著或极显著增加（P<0.05；P<0.01），促进布鲁氏菌16M的细胞内繁殖。同时，经SUMO-2过表达后，IFN-γ和TNF-α水平极显著升高（P<0.01）。经SUMO-2干扰后，TNF-α水平显著降低（P<0.05），IFN-γ水平极显著降低（P<0.01），SUMO-2在RAW264.7细胞中的表达变化也影响IFN-γ和TNF-α的产生。综上所述，SUMO-2蛋白在布鲁氏菌胞内存活中起着重要作用，可能有助于阐明布鲁氏菌感染的致病机制。 |
| 关 键 词： | 布鲁氏菌 SUMO-2 过表达 干扰 菌落计数 |
| 收稿时间： | 2019-03-21 |
Effects of Ubiquitin-related Modified Protein SUMO-2 on the Survival of Brucella 16M in RAW264.7 Cells |
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| DENG Xiaoyu,YI Jihai,LI Qifeng,HE Jinke,YANG Qin,WANG Yueli,WANG Zhen,WANG Yong,CHEN Chuangfu.Effects of Ubiquitin-related Modified Protein SUMO-2 on the Survival of Brucella 16M in RAW264.7 Cells[J].China Animal Husbandry & Veterinary Medicine,2019,46(8):2257-2264. | |
| Authors: | DENG Xiaoyu YI Jihai LI Qifeng HE Jinke YANG Qin WANG Yueli WANG Zhen WANG Yong CHEN Chuangfu |
| Institution: | 1. College of Animal Science and Technology, Shihezi University, Shihezi 832000, China; 2. College of Life Sciences, Shihezi University, Shihezi 832000, China |
| Abstract: | |
| Keywords: | Brucella SUMO-2 overexpression interference colony count |
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