| 禽流感病毒M2e特异性多肽ELISA检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 郑其升,徐公豹,邓碧华,何家惠,侯继波.禽流感病毒M2e特异性多肽ELISA检测方法的建立[J].畜牧与兽医,2010,42(3). |
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| 作者姓名： | 郑其升 徐公豹 邓碧华 何家惠 侯继波 |
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| 作者单位： | 江苏省农业科学院国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏,南京,210014 |
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| 基金项目： | 江苏省高科技计划资助项目，江苏省农业科学院博士后基金项目 |
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| 摘 要： | 本研究人工合成禽流感病毒H5N1亚型M2蛋白的膜外区(M2e),并偶联至半抗原载体血蓝蛋白(KLH),免疫SPF鸡,共免疫3次,每次间隔两周。所获得的阴阳性血清用于ELISA方法的建立,通过方阵滴定确定了人工合成的23肽包被96孔ELISA板的最佳浓度为5μg/mL;1%BSA为封闭液,37℃封闭3 h;被检测血清的最佳稀释度为1∶400,一抗反应时间为37℃,45 min;二抗反应时间为37℃30 min;选用TMB为底物,显色15 min,用2 mol/L H2SO4为终止液为检测血清中抗M2e抗体滴度奠定基础。根据建立的ELISA方法,检测3次免疫2周后的SPF鸡血清中抗M2e抗体,血清开始1∶100倍稀释之后做倍比稀释,测得平均滴度分别为1∶13 500和1∶20 500。
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| 关 键 词： | 禽流感病毒 M2e 多肽 间接ELISA |
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