| 短柄ISSR-PCR反应体系的优化 |
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| 引用本文： | 丁丽亚,金则新,李钧敏.短柄ISSR-PCR反应体系的优化[J].福建林业科技,2006,33(1):45-47. |
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| 作者姓名： | 丁丽亚 金则新 李钧敏 |
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| 作者单位： | 1. 北京林业大学资源与环境学院,北京,100083;台州学院生态研究所,浙江,临海,317000
2. 台州学院生态研究所,浙江,临海,317000 |
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| 基金项目： | 浙江省自然科学基金资助项目(Y504220)，台州市科技局资助项目(044205) |
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| 摘 要： | 以短柄(Quercus glanduliferavar.brevipetiolata)的DNA为材料,对影响PCR扩增效果的一些因素诸如模板DNA用量、Taq酶的用量、镁离子浓度、dNTP的浓度、引物用量和牛血清白蛋白浓度等指标进行筛选和优化。结果显示适合短柄ISSR-PCR分析最适宜的PCR反应条件为:10μL PCR反应体积中,1×Taq酶配套缓冲液(10 mmol.L-1Tris-HCl,pH9.0,50 mmol.L-1KCl,0.1%Triton X-100),0.75UTaq DNA聚合酶,2 mmol.L-1MgCl2,0.2 mmol.L-14×dNTP,12 pmol引物,10 ng模板DNA,2 mg.mL-1牛血清白蛋白。短柄ISSR扩增较适宜的退火温度为54.4℃。
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| 关 键 词： | 短柄 ISSR 反应体系 优化 |
| 文章编号： | 1002-7351(2006)01-0045-03 |
| 修稿时间： | 2005年9月5日 |
Optimization of the ISSR-PCR reaction system of Quercus glandulifera var.brevipetiolata |
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| DING Li-ya,JIN Zen-xin,LI Jun-min.Optimization of the ISSR-PCR reaction system of Quercus glandulifera var.brevipetiolata[J].Journal of Fujian Forestry Science and Technology,2006,33(1):45-47. |
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| Authors: | DING Li-ya JIN Zen-xin LI Jun-min |
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| Abstract: | Factors which affect the ISSR-PCR amplification such as template DNA usage,Taq DNA polymerase,Mg~(2+) concentration,dNTP concentration,primer usage and bovine serum albumin concentration,were optimized and selected by using the materials of Quercus glandulifera var.brevipetiolata DNA.The results showed that the conditions suitable for ISSR-PCR of Quercus glandulifera var.brevipetiolata were as follows:1×Taq buffer(10 mmol·L~(-1) Tris-HCl,pH9.0,50 mmol·L~(-1) KCl,0.1% Triton X-100),0.75U Taq DNA polymerase,2.0 mmol·L~(-1) MgCl_2,0.2 mol·L~(-1) 4×dNTP,12 pmol primers,10ng template DNA、2 mg·mL~(-1) bovine serum albumin. The suitable annealing temperature in the ISSR-PCR reaction system was 54.4℃. |
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| Keywords: | Quercus glandulifera var brevipetiolata ISSR reaction system optimization |
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