| 荧光报告质粒构建及其在布鲁菌细胞侵袭试验中的应用 |
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| 引用本文： | 钟志军,乔凤,于爽,任志华,徐杰,王玉飞,黄祥明,陈泽良,兰景超,吴孔菊.荧光报告质粒构建及其在布鲁菌细胞侵袭试验中的应用[J].中国兽医学报,2014(1):61-65. |
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| 作者姓名： | 钟志军 乔凤 于爽 任志华 徐杰 王玉飞 黄祥明 陈泽良 兰景超 吴孔菊 |
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| 作者单位： | ;1.四川农业大学动物医学院;2.动物疫病与人类健康四川省重点实验室;3.军事医学科学院疾病预防控制所;4.海南省皮肤病医院 海南省皮肤性病防治中心 |
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| 摘 要： | 采取质粒shuffling方法,将含GFPmut1的pPS858和能在布鲁菌中复制的质粒pBBR1MCS-2经KpnⅠ酶切后连接,转化DH5α,利用双抗性筛选重组质粒pBBR1-GFP。将荧光质粒转入布鲁菌,获得荧光标记布鲁菌,并用构建好的荧光标记布鲁菌侵染巨噬细胞J774A.1,探讨其用于细胞侵袭试验的可行性。结果显示,成功构建布鲁菌荧光报告质粒pBBR1-GFP,用构建好的荧光标记布鲁菌侵染巨噬细胞后,在细胞内观察到带荧光的布鲁菌,且荧光强度与胞内细菌数成正比。细胞侵袭动态试验结果表明,细菌与细胞共孵育45min后,胞内细菌达到饱和。结果表明,成功构建了布鲁菌的荧光质粒报告系统,可用于布鲁菌细胞侵袭试验。
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| 关 键 词： | 布鲁菌 荧光报告质粒 侵袭试验 |
Construction of a new GFP plasmid and its primary application in Brucella cell infection |
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