| 基于易错PCR技术的中性内切葡聚糖酶基因的定向进化 |
| |
| 引用本文： | 姚友旭,李雨霏,侯晟琦,李春梅,陈惠,廖燕.基于易错PCR技术的中性内切葡聚糖酶基因的定向进化[J].农业生物技术学报,2011,19(6). |
| |
| 作者姓名： | 姚友旭 李雨霏 侯晟琦 李春梅 陈惠 廖燕 |
| |
| 作者单位： | 四川农业大学生命科学与理学院,雅安,625014 |
| |
| 基金项目： | 四川省科技支撑计划(No.2008GZ0150)资助 |
| |
| 摘 要： | 纤维素酶的工业应用一直受酶活性低,成本高的限制,为了提高中性内切葡聚糖酶的活性,本研究利用易错PCR技术对来自枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis )C-36的内切葡聚糖酶基因进行定向进化研究,在酶分子水平上改造内切葡聚糖酶分子.实验获得了最佳突变株b-15和b-28,其内切葡聚糖酶活力比亲本酶分别提高了2.1和3.6倍.序列分析表明:突变体b-15有6个碱基发生了突变,分别是A360G、T402A、A419T、T648A、A1208G和A1397T,导致4个氨基酸突变,分别是N134K、Q140L、N403S和Q466L；b-28只有1个碱基发生了突变,导致了398位Lys突变为Arg.通过SWISS-MODEL服务器模拟酶的三维结构,分析表明,b-15改变的4个氨基酸分别位于催化结构域的第4和第5个α螺旋之间的转角和结合结构域的第5个β折叠及第9和第10个β折叠之间的转角；b-28的突变位于结合结构域的第4个β折叠.同时,对获得的两株突变株b-15和b-28用正交试验优化产酶条件,优化后的酶活分别达到4.542和5.136 U/mL,是优化前的2.2和1.5倍.实验获得了酶活性提高的内切葡聚糖酶菌株,为进一步在分子水平研究内切葡聚糖酶的功能和其应用打下了基础,也为高酶活酶分子在其他高表达系统的表达提供了基础材料.
|
| 关 键 词： | 枯草芽胞杆菌 内切葡聚糖酶 定向进化 产酶条件 |
Directed Evolution of Neutral Endoglucanase Gene by Error-prone PCR |
| |
| Yao Youxu
,
Li Yufei
,
Hou Shengqi
,
Li Chunmei
,
Chen Hui
,
Liao Yan.Directed Evolution of Neutral Endoglucanase Gene by Error-prone PCR[J].Journal of Agricultural Biotechnology,2011,19(6). |
| |
| Authors: | Yao Youxu Li Yufei Hou Shengqi Li Chunmei Chen Hui Liao Yan |
| |
| Institution: | Yao Youxu Li Yufei Hou Shengqi Li Chunmei Chen Hui* Liao Yan College of Life Science,Sichuan Agricultural University,Ya'an 625014,China |
| |
| Abstract: | Low enzymatic activity and high cost are the two main problems that limit the industrial applications of cellulose.In order to enhance the enzymatic activity of neutral endoglucanase activity,error-prone PCR was conducted to engineer the Bacillus subtilis C-36 endoglucanase gene.Two optimum mutants,b-15 and b-28 were obtained,with an endoglucanase activity 2.1 folds and 3.6 folds increased,respectively.The sequence of b-15 endoglucanase gene showed six nucleotide substitutions leading to four mutated amino ... |
| |
| Keywords: | Bacillus subtilis Endoglucanase Directed evolution Fermentation conditions |
| 本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录！ |
|
