| 里氏木霉纤维二糖水解酶基因cbh1的分子改造 |
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| 引用本文： | 陈小玲,张穗生,黄俊,雷富,陈东.里氏木霉纤维二糖水解酶基因cbh1的分子改造[J].广西农业科学,2014,45(10). |
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| 作者姓名： | 陈小玲 张穗生 黄俊 雷富 陈东 |
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| 作者单位： | 1. 广西科学院非粮生物质酶解国家重点实验室/国家非粮生物质能源工程技术研究中心/广西生物质炼制重点实验室,南宁,530007
2. 广西科学院广西近海海洋环境科学重点实验室,南宁,530007 |
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| 基金项目： | 国家科技支撑计划项目，国家“863”计划项目，广西科学研究与技术开发计划项目 |
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| 摘 要： | 目的]用分子改造的方法改造里氏木霉(Trichoderma reesei的纤维二糖水解酶基因cbh1,提高其纤维素酶活力,为工业化生产纤维素酶提供参考.方法]用DNaseI消化里氏木霉cbh1,回收100 bp左右的片段后用T4 DNA连接酶连接,以连接产物作为模板进行PCR扩增,将PCR改造的cbh1基因转化里氏木霉原生质体,使改造的cbh1基因与里氏木霉原有的cbh1基因发生同源重组.通过比较滤纸酶活力的方法筛选纤维素酶活力提高的突变菌株,在NCBI上比对分析突变菌株的cbh1序列.结果]经克隆测序获得基因片段大小为637 bp,与里氏木霉同属菌株cbh1基因的相似性在88‰98％,确定为里氏木霉cbh1的基因片段.经DNaseI消化15 min、T4 DNA连接酶连接、经PCR扩增获得改造后的cbh1基因.将改造cbh1基因片段转化里氏木霉原生质体,得到cbh1基因突变体库.从cbh1基因突变体库中筛选获得1株纤维素酶滤纸酶活比出发菌株高1.7518倍的突变菌株E2-1.序列比对分析发现,与出发菌株相比,突变菌株E2-1的cbh1基因有14个碱基发生了突变,其中5个碱基为置换突变,8个碱基为缺失突变,1个碱基为插入突变,分布于cbh1基因的9个位置.结论]改造后的cbhl因能与里氏木霉的染色体DNA发生同源重组,进而提高突变菌株的纤维素滤纸酶活力.
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| 关 键 词： | 里氏木霉 纤维素酶 纤维二糖水解酶基因 分子改造 碱基突变 |
Molecular modification of cellobiohydrolase gene cbh1 from Trichoderma reesei |
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| CHEN Xiao-ling,ZHANG Sui-sheng,HUANG Jun,LEI Fu,CHEN Dong.Molecular modification of cellobiohydrolase gene cbh1 from Trichoderma reesei[J].Guangxi Agricultural Sciences,2014,45(10). |
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| Authors: | CHEN Xiao-ling ZHANG Sui-sheng HUANG Jun LEI Fu CHEN Dong |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | T reesei cellulase cbh1 gene molecular modification base mutation |
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