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| 正交设计优化黑褐苔草ISSR-PCR反应体系 | |
| 引用本文： | 胡延萍,王莉,包蕊,石琳,旭荣花,李毅.正交设计优化黑褐苔草ISSR-PCR反应体系[J].草地学报,2014,22(4):911. |
| 作者姓名： | 胡延萍 王莉 包蕊 石琳 旭荣花 李毅 |
| 作者单位： | 1. 中国科学院西北高原生物研究所, 青海 西宁 810008; 2. 海西州科学技术局, 青海 德令哈 817000; 3. 中国科学院大学, 北京 100049 |
| 基金项目： | 国家科技支撑计划(2012BAC08B04);国家自然科学基金(31200245);2011年中国科学院“西部之光”人才培养计划“西部博士资助”项目资助 |
| 摘 要： | 采用正交设计对黑褐苔草（Carexa trofusca）ISSR-PCR反应的Mg2+、Taq DNA聚合酶、dNTP、引物和DNA模板进行优化，以期建立最佳反应条件并筛选退火温度。结果表明：黑褐苔草20μLISSR-PCR最佳反应体系为：1.80μmol·L-1 Mg2+、0.60 U Taq DNA聚合酶、0.125μmol·L-1 dNTP、0.3μmol·L-1 Primer和50ngDNA模板；引物UBC807适宜退火温度为55℃。该体系能在不同个体中扩增出清晰的、稳定性好的条带。 |
| 关 键 词： | 黑褐苔草 ISSR-PCR 反应体系 正交设计 |
| 收稿时间： | 2013-11-13 |
Optimizing ISSR-PCR System of Carex atrofusca Using Orthogonal Design |
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| HU Yan-ping,WANG Li,BAO Rui,SHI Lin,XU Rong-hua,LI Yi.Optimizing ISSR-PCR System of Carex atrofusca Using Orthogonal Design[J].Acta Agrestia Sinica,2014,22(4):911. | |
| Authors: | HU Yan-ping WANG Li BAO Rui SHI Lin XU Rong-hua LI Yi |
| Institution: | 1. Northwest Institute of Plateau Biology, Chinese Academy of Sciences, Xining, Qinghai Province 810008, China; 2. Haixi Science and Technology Bureau, Delingha, Qinghai Province 817000, China; 3. University of Chinese Academy of Sciences, Beijing 100049, China |
| Abstract: | An orthogonal design was used to optimize the ISSR-PCR system of Carex atrofusca at four levels of five factors (Mg2+, Taq DNA polymerase, dNTP, primer and DNA template). Then, based on the optimal ISSR-PCR system, the annealing temperature was selected. The optimal PCR (20 μL) mixture contained 1.80 mmol·L-1 Mg2+, 0.60 U Taq DNA polymerase, 0.125 mmol·L-1 dNTP, 0.3 μmol·L-1 primer and 50 ng template DNA. The suitable annealing temperature of primer UBC807 was 55℃. With the optimal system of ISSR-PCR, clear and steady bands were obtained in different individuals of C. atrofusca. |
| Keywords: | Carex atrofusca ISSR-PCR Reaction conditions Orthogonal design |
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