| 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP2主要抗原区域的原核表达及间接ELISA检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 林华,郭万柱,张博,陈弟诗,陈扬,王小玉,徐志文,王印,朱玲.高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP2主要抗原区域的原核表达及间接ELISA检测方法的建立[J].畜牧兽医学报,2010,41(6). |
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| 作者姓名： | 林华 郭万柱 张博 陈弟诗 陈扬 王小玉 徐志文 王印 朱玲 |
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| 作者单位： | 四川农业大学,动物生物技术中心,雅安,625014 |
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| 基金项目： | 教育部长江学者和创新团队发展计划 |
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| 摘 要： | 本研究以高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HPPRRSV)重组NSP2蛋白为包被抗原,建立了检测PRRSV抗体的间接ELISA方法。通过RT-PCR技术,从PRRSV SCMS08株中,成功扩增出NSP2的主要抗原区域。将其克隆到pET-32a(+),成功构建原核表达载体,并转化宿主菌(E.coli)Rosetta 2(DE3)。以镍柱纯化表达蛋白,SDS-PAGE检测证实重组蛋白获得了高效表达,Western blot检测表明所表达蛋白能够被抗组氨酸标签单克隆抗体和PRRSV阳性血清识别。以此蛋白包被酶标板,初步建立了PRRSV NSP2-ELISA诊断方法。优化的NSP2-ELISA的最佳抗原包被浓度为1.7μg·mL-1,血清的最佳稀释度为1∶40。用该方法检测185份血清样品,与IDEXX公司ELISA试剂盒检测结果符合率为90.8%。建立的间接ELISA方法敏感性高、特异性强,可用于猪繁殖与呼吸综合征的常规诊断及流行病学调查。
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| 关 键 词： | 猪繁殖与呼吸综合征 间接ELISA |
Prokaryotic Expression of NSP2 Major Antigen Region of Highly Pathogenic PRRSV and Development of an Indirect ELISA Based on the Expressed Protein |
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| LIN Hua,GUO Wan-zhu,ZHANG Bo,CHEN Di-shi,CHEN Yang,WANG Xiao-yu,XU Zhi-wen,WANG Yin,ZHU Ling.Prokaryotic Expression of NSP2 Major Antigen Region of Highly Pathogenic PRRSV and Development of an Indirect ELISA Based on the Expressed Protein[J].Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica,2010,41(6). |
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| Authors: | LIN Hua GUO Wan-zhu ZHANG Bo CHEN Di-shi CHEN Yang WANG Xiao-yu XU Zhi-wen WANG Yin ZHU Ling |
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| Keywords: | NSP2 |
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