| 鸡传染性喉气管炎病毒微滴式数字PCR定量检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 谢志勤,谢芝勋,张艳芳,范 晴,谢丽基,万丽军,罗思思,李 孟,张民秀,曾婷婷,黄娇玲,王 盛,李 丹,韦 悠,李小凤,任红玉,阮志华.鸡传染性喉气管炎病毒微滴式数字PCR定量检测方法的建立[J].西北农业学报,2024(3):381-388. |
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| 作者姓名： | 谢志勤 谢芝勋 张艳芳 范 晴 谢丽基 万丽军 罗思思 李 孟 张民秀 曾婷婷 黄娇玲 王 盛 李 丹 韦 悠 李小凤 任红玉 阮志华 |
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| 作者单位： | （广西壮族自治区兽医研究所，广西兽医生物技术重点实验室，南宁 530001） |
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| 基金项目： | 广西重点研发计划（桂科AB16380003）；广西基地与人才专项（AD17195083）；广西创新驱动专项专项（AA17204057）；国家“万人计划”领军人才专项（W02060083)；“广西八桂学者”专项 (2019A50)。 |
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| 摘 要： | 旨在建立检测鸡传染性喉气管炎病毒(infectious laryngotracheitis virus, ILTV)绝对定量方法。根据已发表的鸡ILTV的TK基因序列，针对其保守区域分别设计1对特异引物和1条探针，建立检测鸡ILTV的微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)方法，并评价其特异性、敏感性和重复性。结果显示，建立方法的最佳引物浓度为20μmol/μL,最佳探针浓度为10μmol/μL,最佳退火温度为56℃。特异性检测结果显示，建立的方法只检出ILTV,没有检出其他病原株。敏感性检测结果显示，采用建立的方法定量检出ILTV重组质粒标准品的最低限为4.6拷贝/μL。对3个连续稀释的pMD18-ILTV重组质粒DNA进行检测，3次重复检测结果的变异系数均小于5%。对83份病鸡喉拭子、肺及脾组织样品进行检测，采用建立的ddPCR检出ILTV阳性样品10份，荧光定量PCR检出ILTV阳性样品9份，ddPCR的阳性检出率(12.05%)高于荧光定量PCR的阳性检出率(10.84%)。结果表明，建立的ddPCR方法定量检测ILTV特异性强、敏感性高、重复性好...
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| 关 键 词： | 鸡传染性喉气管炎病毒 微滴式数字PCR 定量检测 |
Establishment of Droplet Digital PCR Quantitative Detection Method for Detection of Infectious Laryngotracheitis Virus |
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| XIE Zhiqin,XIE Zhixun,ZHANG Yanfang,FAN Qing,XIE Liji,WAN Lijun,LUO Sisi,LI Meng,ZHANG Minxiu,ZENG Tingting,HUANG Jiaoling,WANG Sheng,LI Dan,WEI You,LI Xiaofeng,REN Hongyu and RUAN Zhihua.Establishment of Droplet Digital PCR Quantitative Detection Method for Detection of Infectious Laryngotracheitis Virus[J].Acta Agriculturae Boreali-occidentalis Sinica,2024(3):381-388. |
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| Authors: | XIE Zhiqin XIE Zhixun ZHANG Yanfang FAN Qing XIE Liji WAN Lijun LUO Sisi LI Meng ZHANG Minxiu ZENG Tingting HUANG Jiaoling WANG Sheng LI Dan WEI You LI Xiaofeng REN Hongyu and RUAN Zhihua |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Infectious laryngotracheitis virus (ILTV) Droplet digital PCR (ddPCR) Quantitative detection |
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