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| 戊型肝炎病毒RdRp基因真核表达质粒的构建及表达 | |
| 引用本文： | 黄芬,禹文海,马天武,井申荣,曾韦锟,华修国.戊型肝炎病毒RdRp基因真核表达质粒的构建及表达[J].草业科学,2012,25(4). |
| 作者姓名： | 黄芬 禹文海 马天武 井申荣 曾韦锟 华修国 |
| 作者单位： | 1. 昆明理工大学生命科学与技术学院,昆明,650224 2. 中国医学科学院医学生物学研究所实验动物部,昆明,650118 3. 上海交通大学农业与生物学院,上海,200240 |
| 摘 要： | 目的 构建戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV )RdRp基因真核表达质粒,并检测其在PLC/PRF/5、A549和HepG2 3种细胞中的表达,为后续RdRp的研究提供实验依据.方法 利用RT-nPCR法从阳性HEV粪便中扩增RdRp基因片段,插入pcDNA3.0真核表达载体中,并在其3’端插入EGFP报告基因,构建融合表达质粒pcDNA3.0-RdRp-EGFP,脂质体法转染PLC/PRF/5、A549和HepG2细胞,荧光显微镜观察报告基因的表达,RT-nPCR检测RdRp基因mRNA的转录情况,Western blot检测RdRp蛋白的表达.结果 重组表达质粒经酶切鉴定和测序证实构建正确；RdRp基因和蛋白在A549和HepG2细胞中可高效、特异性表达.结论 成功构建了RdRp基因对真核表达质粒,并在A549和HepG2培养细胞中大量表达,为进一步研究RdRp在HEV复制过程中的功能奠定了基础. |
| 关 键 词： | 戊型肝炎病毒属 RdRp基因 真核细胞 基因表达 |
Construction of eukaryotic expression vector and expression of hepatitis E virus RdRp gene |
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| HUANG Fen , YU Wen-hai , MA Tian-wu , JING Shen-rong , ZENG Wei-kun , HUA Xiu-guo.Construction of eukaryotic expression vector and expression of hepatitis E virus RdRp gene[J].Pratacultural Science,2012,25(4). | |
| Authors: | HUANG Fen YU Wen-hai MA Tian-wu JING Shen-rong ZENG Wei-kun HUA Xiu-guo |
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