| 犬细小病毒VP2蛋白的原核表达与纯化 |
| |
| 引用本文： | 龙丹丹,嵇辛勤,段志强,阮涌,陈强,雷云,万彪,胡焱.犬细小病毒VP2蛋白的原核表达与纯化[J].中国畜牧兽医,2018(3). |
| |
| 作者姓名： | 龙丹丹 嵇辛勤 段志强 阮涌 陈强 雷云 万彪 胡焱 |
| |
| 作者单位： | 贵州大学动物科学学院;贵州大学动物疫病与兽医公共卫生重点实验室;贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室; |
| |
| 摘 要： | 为了研究犬细小病毒(canine parovirus,CPV)VP2蛋白的结构和功能,本试验对CPV VP2蛋白进行表达和纯化。采用大肠杆菌表达外源蛋白的方法,将CPVVP2基因插入原核表达载体pET-32a(+)中构建重组原核表达载体pET-VP2,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,在不同IPTG浓度、诱导温度和诱导时间条件下进行原核表达,确定最佳诱导条件。最佳条件下的诱导产物经超声破碎离心后,利用镍柱对重组蛋白进行纯化并用SDS-PAGE和Western blotting进行双重鉴定。结果显示,重组质粒pET-VP2经双酶切鉴定分别获得大小为5 900bp左右的载体条带和1 755bp左右的目的基因条带,成功构建了pET-VP2重组质粒;重组VP2蛋白的分子质量约为64ku,与预期大小一致,且在37℃、1.0mmol/L IPTG、诱导5h条件下表达量最高,条带最亮;蛋白超声破碎后经SDS-PAGE发现,只在沉淀中出现了目的条带,而上清中并未出现相应条带,说明重组蛋白均以包涵体的形式存在;纯化后获得的重组蛋白,经SDS-PAGE和Western blotting双重鉴定,均在64ku处出现条带,说明纯化后的蛋白为重组蛋白pET-VP2。本试验通过对CPV VP2蛋白的原核表达及纯化成功获得了大量纯度较高的CPV VP2蛋白,为今后制备CPV VP2蛋白多克隆抗体及进一步研究该蛋白在对治疗犬细小病毒病中的临床应用价值提供了基础理论依据。
|
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ |
|
