| 流行性乙型脑炎病毒NS1基因克隆及其蛋白表达纯化 |
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| 引用本文： | 张孝忠,刘一凡,谷思颖,余娜,段彦祥,李有文.流行性乙型脑炎病毒NS1基因克隆及其蛋白表达纯化[J].中国畜牧兽医,2018(8). |
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| 作者姓名： | 张孝忠 刘一凡 谷思颖 余娜 段彦祥 李有文 |
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| 作者单位： | 塔里木大学动物科学学院;新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室 |
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| 摘 要： | 为了表达流行性乙型脑炎(epidemic encephalitis type B)非结构蛋白NS1,本研究通过PCR扩增了日本乙脑病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)P3株NS1基因,并分别构建了其融合表达His和GST标签的原核表达载体,经PCR、酶切和测序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21感受态细胞,用IPTG诱导表达了NS1融合蛋白,通过SDS-PAGE电泳和Western blotting进行鉴定,并用尿素变性复性和镍亲合层析法纯化目的蛋白。结果显示,试验成功构建了NS1的两个原核表达载体pET-42b-NS1和pGEX-KG-NS1,P3株NS1基因全长1 056bp,以包涵体的形式表达约40ku的蛋白,尿素变性复性效果较好,镍亲合层析纯化得到纯度和浓度均较高的NS1蛋白。JEV NS1基因可以通过原核表达系统高效表达蛋白并纯化得到高纯度产物,为后期生物学功能研究奠定基础。
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