| 牛支原体新疆分离株P48基因的克隆、原核表达及重组蛋白免疫原性研究 |
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| 引用本文： | 张锐,杨铭伟,任静静,朱玲,柳旭伟,剡根强.牛支原体新疆分离株P48基因的克隆、原核表达及重组蛋白免疫原性研究[J].中国畜牧兽医,2018(7). |
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| 作者姓名： | 张锐 杨铭伟 任静静 朱玲 柳旭伟 剡根强 |
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| 作者单位： | 石河子大学动物科技学院 |
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| 摘 要： | 试验旨在确定牛支原体P48基因的免疫原性,为进一步筛选牛支原体免疫保护性基因奠定基础。本研究以牛支原体新疆分离株为研究对象,运用Overlap PCR方法扩增得到点突变后的牛支原体新疆分离株P48基因,构建原核表达载体pET-32a(+)-P48,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,在诱导剂ITPG的诱导下获得重组蛋白P48,纯化后的重组P48蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,运用Western blotting和ELISA方法验证其反应原性和免疫原性。结果表明,试验成功构建原核表达载体pET-32a(+)-P48,重组蛋白P48大小约为66ku,纯化后的牛支原体P48重组蛋白免疫小鼠后可产生良好的免疫反应,血清抗体滴度达到较高水平(D450nm值为1.126)。Western blotting结果显示,抗牛支原体P48重组蛋白的鼠血清与牛支原体P48重组蛋白及牛支原体全菌蛋白抗原均能产生明显的抗原抗体反应,表明P48重组蛋白具有良好的免疫原性与反应原性,可作为牛支原体新型疫苗的候选基因,且牛支原体新疆分离株P48基因与国内外5株牛支原体P48基因的同源性很高,亲缘关系较近。
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