| fat-1基因密码子优化及在家兔胎儿成纤维细胞中的初步表达 |
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| 引用本文： | 周红梅,王颖,张立凡,华绪川,王争光,徐宁迎,郭晓令.fat-1基因密码子优化及在家兔胎儿成纤维细胞中的初步表达[J].江苏农业学报,2011,27(2). |
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| 作者姓名： | 周红梅 王颖 张立凡 华绪川 王争光 徐宁迎 郭晓令 |
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| 作者单位： | 浙江大学动物科学学院,浙江,杭州,310029 |
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| 基金项目： | 国家"863"计划项目 |
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| 摘 要： | 根据家兔基因密码子使用偏好性,对引自GenBank的秀丽隐杆线虫fat-1基因编码序列进行密码子优化,通过全基因合成的方法获得优化后的fat-1基因(命名为opfat-1);从秀丽隐杆线虫中RT-PCR扩增获得fat-1.将扩增的fat-1和合成的opfat-1基因分别构建到绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-C1中.采用脂质体LipofectamineTM转染法将fat-1和opfat-1基因转入家兔胎儿成纤维细胞(Rabbit fetal fibroblast cells,rFFCs)中.对比不同DNA和转染试剂用量以及细胞暴露于DNA、转染试剂中作用时间探讨影响rFFCs转染效率的参数,经过优化,最优的rFFCs转染条件为:LipofectamineTM用量2～3μl,DNA量0.8～1.0μg,LipofectamineTM与DNA、细胞共培养时间为8 h.通过绿色荧光标记和RT-PCR检测转染细胞中融合蛋白和目的基因的表达.密码子优化的opfat-1与fat-1相比,体外瞬时表达效率有极为显著的提高;G418抗性筛选获得转基因单克隆细胞,RT-PCR初步验证fat-1和opfat-1基因均在家兔胎儿成纤维细胞中稳定转录表达.
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| 关 键 词： | fat-1基因 密码子优化 转染 家兔胎儿成纤维细胞 |
Codon optimization of fat-1 gene and its expression profiles in rabbit fetal fibroblast cells |
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| ZHOU Hong-mei,WANG Ying,ZHANG Li-fan,HUA Xu-chuan,WANG Zheng-guang,XU Ning-ying,GUO Xiao-ling.Codon optimization of fat-1 gene and its expression profiles in rabbit fetal fibroblast cells[J].Jiangsu Journal of Agricultural Sciences,2011,27(2). |
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| Authors: | ZHOU Hong-mei WANG Ying ZHANG Li-fan HUA Xu-chuan WANG Zheng-guang XU Ning-ying GUO Xiao-ling |
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