| 大白菜KASP反应体系的优化与建立 |
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| 引用本文： | 杨双娟,原玉香,魏小春,王志勇,赵艳艳,姚秋菊,张晓伟.大白菜KASP反应体系的优化与建立[J].园艺学报,2018,45(12):2442-2452. |
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| 作者姓名： | 杨双娟 原玉香 魏小春 王志勇 赵艳艳 姚秋菊 张晓伟 |
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| 作者单位： | 河南省农业科学院园艺研究所，郑州 450002 |
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| 基金项目： | 国家现代农业产业技术体系建设专项资金项目（CARS-23-G-16）；农业部黄淮海(河南)蔬菜观测站项目（10205020）；河南省科技攻关项目（182102110438）；河南省农业科学院自主创新项目（2018ZC30） |
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| 摘 要： | 以大白菜基因组DNA为模板，对影响竞争性等位基因特异性PCR（Kompetitive allele specific PCR，KASP）的反应体积、引物浓度和DNA模板用量等3个参数进行优化，建立了适用于大白菜的KASP反应体系。96孔模块最佳反应体系中，总反应体积为8 μL，其中模板DNA（60 ~ 80 ng · μL-1）1 μL，KASP Master mix（2×）4 μL，引物混合物（50 μmol · L-1）0.14 μL，ddH2O 3 μL。384孔模块最佳反应体系中，总反应体积为4 μL，其中模板DNA（60 ~ 80 ng · μL-1）1 μL，KASP Master mix（2×）2 μL，引物混合物（50 μmol · L-1）0.07 μL，ddH2O 1 μL。利用不同引物和不同的大白菜材料对优化的反应体系进行验证，均获得了较好的KASP-SNP分型，验证了该优化体系的稳定性。该反应体系可以用于大白菜遗传多样性研究、基因定位、遗传图谱构建等遗传学研究。
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| 关 键 词： | 大白菜 KASP 反应体系优化 |
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