| 猪ASC及Ub基因的克隆及真核表达重组质粒的构建 |
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| 引用本文： | 樊钰莹,华思红,王志鹏,孙永科,杨玉艾.猪ASC及Ub基因的克隆及真核表达重组质粒的构建[J].动物医学进展,2019,40(1):7-11. |
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| 作者姓名： | 樊钰莹 华思红 王志鹏 孙永科 杨玉艾 |
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| 作者单位： | 云南农业大学动物医学院,云南昆明,650201;云南农业大学动物医学院,云南昆明,650201;云南农业大学动物医学院,云南昆明,650201;云南农业大学动物医学院,云南昆明,650201;云南农业大学动物医学院,云南昆明,650201 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金;国家自然科学基金 |
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| 摘 要： | 炎症小体不仅参与机体的天然免疫反应,同时还参与机体抗病毒等多种宿主防御反应。在多种疾病相关信号通路反应中都伴随着蛋白质的泛素化修饰。NOD样受体(NLRs)介导的炎症小体信号通路中,凋亡相关点状样蛋白(ASC)是关键的接头蛋白。为了解猪瘟病毒(CSFV)感染对ASC泛素化水平的影响,通过RT-PCR从猪血管内皮细胞(ECs)中扩增获得ASC和泛素(Ub)的全长cDNA双链片段,连接至克隆载体pMD-18T,获得重组克隆质粒pMD-ASC和pMD-Ub。双酶切pMD-ASC获得ASC目的序列,连接至pcDNA3.1-Flag,双酶切pMD-Ub获得Ub目的序列,连接至pcDNA3.0-HA,获得重组表达质粒pcDNA3.1-Flag-ASC和pcDNA3.0-HA-Ub。将pcDNA3.1-Flag-ASC和pcDNA3.0-HA-Ub转染ECs,Western blot在蛋白水平检测ASC和Ub的表达。结果表明,成功构建了带有Flag标签的ASC真核表达质粒和带有HA标签的Ub真核表达质粒,且在ECs中获得高效表达,为进一步体外研究CSFV调控猪血管内皮细胞ASC泛素化的机制提供了实验基础。
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| 关 键 词： | 猪瘟病毒 凋亡相关点状样蛋白 泛素 真核表达 泛素化 |
Cloning and Eukaryotic Expression Plasmid Construction of Porcine ASC and Ub Genes |
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| FAN Yu-ying,HUA Si-hong,WANG Zhi-peng,SUN Yong-ke,YANG Yu-ai.Cloning and Eukaryotic Expression Plasmid Construction of Porcine ASC and Ub Genes[J].Progress In Veterinary Medicine,2019,40(1):7-11. |
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| Authors: | FAN Yu-ying HUA Si-hong WANG Zhi-peng SUN Yong-ke YANG Yu-ai |
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| Institution: | (College of Veterinary Medicine,Yunnan Agricultural University,Kunming,Yunnan,650201,China) |
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| Abstract: | FAN Yu-ying;HUA Si-hong;WANG Zhi-peng;SUN Yong-ke;YANG Yu-ai(College of Veterinary Medicine,Yunnan Agricultural University,Kunming,Yunnan,650201,China) |
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| Keywords: | CSFV ASC Ub eukaryotic expression ubiquitination |
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