| 猪肺炎支原体醛缩酶原核表达及致猪气管上皮细胞凋亡的研究 |
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| 引用本文： | 华利忠,王世杰,马丹夫,刘茂军,冯志新,刘蓓蓓,韦艳娜,于岩飞,邵国青.猪肺炎支原体醛缩酶原核表达及致猪气管上皮细胞凋亡的研究[J].动物医学进展,2019(6):17-22. |
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| 作者姓名： | 华利忠 王世杰 马丹夫 刘茂军 冯志新 刘蓓蓓 韦艳娜 于岩飞 邵国青 |
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| 作者单位： | 江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心;南京农业大学 |
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| 基金项目： | 江苏省农业科技自主创新项目CX(14)5038;国家自然科学基金项目(31400164);江苏省青年基金项目(BK20140754) |
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| 摘 要： | 为了研究Ⅱ类果糖二磷酸醛缩酶(FBA)是否为猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)的毒力因子,并参与其致病作用,根据已发表的猪肺炎支原体醛缩酶全基因序列设计特异性的引物,以猪肺炎支原体168株基因组为模板,通过Overlap PCR点突变扩增醛缩酶基因。将FBA克隆至pET-28a(+)载体后进行序列测定和分析,结果表明,FBA基因全长864 bp。将构建的重组表达质粒pET-28a(+)/FBA转化至大肠埃希菌BL21(DE3),通过筛选获得阳性克隆,重组工程菌在IPTG诱导下成功获得表达融合蛋白猪肺炎支原体Ⅱ类果糖二磷酸醛缩酶(Mhp FBA),大小约为35 ku。纯化蛋白并接种于猪气管上皮细胞至FBA终浓度分别为0、10、50、100、150、200μg/mL,孵育24 h后进行上清中丙酮酸浓度的检测和细胞凋亡检测。结果上清中丙酮酸浓度随着FBA浓度的上升,出现先极显著上升(P<0.01)、后急剧下降的现象;细胞平均凋亡率依次分别为3.54%、10.91%、13.99%、27.19%、32.84%和40.71%,并随着FBA浓度的升高而升高,且相比阴性对照组差异均显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)。成功构建了Mhp FBA重组菌,表达获得了Mhp重组蛋白FBA,该蛋白可能为猪肺炎支原体的毒力因子,参与猪肺炎支原体的致病作用,从而为进一步开展Mhp致病机理和药物研究奠定基础。
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| 关 键 词： | 猪肺炎支原体 果糖二磷酸醛缩酶 原核表达 气管上皮细胞 凋亡 |
Prokaryotic Expression of Aldolase of Mycoplasma hyopneumoniae and Induced Apoptosis in Porcine Tracheal Epithelial Cells in Vitro |
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| HUA Li-zhong,WANG Shi-jie,MA Dan-fu,LIU Mao-jun,FENG Zhi-xin,LIU Bei-bei,WEI Yan-na,YU Yan-fei,SHAO Guo-qing.Prokaryotic Expression of Aldolase of Mycoplasma hyopneumoniae and Induced Apoptosis in Porcine Tracheal Epithelial Cells in Vitro[J].Progress In Veterinary Medicine,2019(6):17-22. |
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| Authors: | HUA Li-zhong WANG Shi-jie MA Dan-fu LIU Mao-jun FENG Zhi-xin LIU Bei-bei WEI Yan-na YU Yan-fei SHAO Guo-qing |
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| Institution: | (Institute of Veterinary Medicine,Jiangsu Academy of Agricultural Sciences,Key Laboratory of Veterinary Biological Engineering and Technology,Ministry of Agriculture,National Center for Engineering Research of Veterinary Bio-products,Nanjing,210014,China;Nanjing Agricultural University,Nanjing,210014,China) |
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| Abstract: | HUA Li-zhong;WANG Shi-jie;MA Dan-fu;LIU Mao-jun;FENG Zhi-xin;LIU Bei-bei;WEI Yan-na;YU Yan-fei;SHAO Guo-qing(Institute of Veterinary Medicine,Jiangsu Academy of Agricultural Sciences,Key Laboratory of Veterinary Biological Engineering and Technology,Ministry of Agriculture,National Center for Engineering Research of Veterinary Bio-products,Nanjing,210014,China;Nanjing Agricultural University,Nanjing,210014,China) |
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| Keywords: | Mycoplasma hyopneumoniae fructose 1 6-bisphosphate aldolase prokaryotic expression swine tracheal epithelial cell apoptosis |
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