| 温郁金SCoT-PCR反应体系的正交优化 |
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| 引用本文： | 陈喆,冯尚国,王振,何仁锋,姜梦莹,王慧中.温郁金SCoT-PCR反应体系的正交优化[J].北方园艺,2015(12):84-90. |
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| 作者姓名： | 陈喆 冯尚国 王振 何仁锋 姜梦莹 王慧中 |
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| 作者单位： | 杭州师范大学生命与环境科学学院,浙江省药用植物种质改良和质量监控重点实验室,浙江杭州310036 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(31070298;30870180)，浙江省科技计划资助项目(2008C12081)，浙江省自然科学基金资助项目(LQ13H280006)，浙江省药用植物种质改良与质量控制技术重点实验室开放资助项目(201304)，浙江省大学生科技创新活动计划暨新苗人才计划资助项目(ZX13005002067)，浙江省大学生科技创新活动计划暨新苗人才计划资助项目(ZX1305002007). |
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| 摘 要： | 以温郁金为试材,运用L25(56)正交设计在5个水平上对影响温郁金SCoT-PCR反应的模板DNA、Mg2+、dNTPs、Taq酶和引物5个因素进行优化试验,对PCR结果进行极差分析。建立并优化温郁金的目标起始密码子多态性-聚合酶链式反应(SCoT-PCR)体系,以期为温郁金的遗传多样性分析及分子鉴定等研究提供技术支持。结果表明:建立了温郁金SCoT-PCR的最佳反应体系(20μL):引物0.8μmol/L,dNTPs 0.4mmol/L,Mg2+1.5mmol/L,Taq酶0.5U,模板DNA 40ng,且确定各因素对温郁金SCoT-PCR反应效果的影响大小依次为:dNTPsTaq酶引物Mg2+模板DNA,其中dNTPs对体系影响最大。优化的温郁金SCoT-PCR反应体系在多个温郁金品种遗传多样性研究中得到了验证,结果表现出良好的稳定性、重复性和多态性丰富等特点,可用于今后温郁金品种遗传多样性分析、系统发育分析、遗传图谱构建、基因定位和分子标记辅助育种等研究。
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| 关 键 词： | 温郁金 SCoT-PCR 体系优化 正交设计 |
Orthogonal Optimization of Start Codon Targeted Polymorphism System in Curcuma wenyujin Y.H.Chen et C.Ling |
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