| 加工番茄PCR-SSCP分子标记体系的建立与优化 |
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| 引用本文： | 马海新,庞胜群,闫丽娟,汪斌,魏海滨,程琳琳.加工番茄PCR-SSCP分子标记体系的建立与优化[J].北方园艺,2015(15):88-93. |
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| 作者姓名： | 马海新 庞胜群 闫丽娟 汪斌 魏海滨 程琳琳 |
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| 作者单位： | 石河子大学农学院,新疆石河子,832003 |
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| 基金项目： | 石河子大学资助项目(gxjs2012-yz08)，新疆生产建设兵团科技局资助项目(2014AB004)，科技支疆计划资助项目(2014AB004). |
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| 摘 要： | 以加工番茄为试验材料,采用PCR-SSCP分子标记技术,对DNA提取方法、PCR反应程序、聚合酶链式反应-单链构象多态性分子标记体系的电泳条件、变性剂等诸多因素进行了研究,筛选和建立了多态性检出率高、带型清晰、重复性好的PCR-SSCP反应体系和反应程序。结果表明:采用CTAB法提取番茄叶片DNA时,在CTAB缓冲液中加入5mol/L NaCl,第一次抽提离心速度和离心时间分别为8 000r/min和15min,可以获得高质量的DNA,PCR扩增程序为94℃5min,94℃1min,52℃30s,72℃1min,72℃10min,29个循环,退火温度52℃,引物大小100~300bp、98℃变性10min,非变性聚丙烯酰胺凝胶浓度8%,电泳1.5~2.5h,聚丙烯酰胺凝胶中不添加甘油为加工番茄PCR-SSCP分子标记体系最佳的条件组合。
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| 关 键 词： | 加工番茄 PCR-SSCP 聚丙烯酰胺凝胶 银染 |
Establishment and Optimization of PCR-SSCP Amplification Reaction System in Processing Tomato |
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