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水稻CRISPRa系统的优化及验证
引用本文:杨 柳,姚毅菲,刘林丽,苏颜琦,刘华伟.水稻CRISPRa系统的优化及验证[J].西北农业学报,2023(10):1587-1593.
作者姓名:杨 柳  姚毅菲  刘林丽  苏颜琦  刘华伟
作者单位:(西北农林科技大学 生命科学学院,陕西杨凌 712100)
基金项目:国家自然科学基金(31772403);国家级大学生创新创业训练计划(202110712222)。
摘    要:CRISPR激活(CRISPR activation, CRISPRa)是通过dCas9-sgRNA复合体融合或招募转录激活域至启动子区以增强基因转录的CRISPR衍生技术。为提高水稻CRISPRa系统特异性及其激活效率,设计点突变引物将dCas9突变为特异性更强的HFdCas9,同时采用2×35S启动子表达密码子优化的水稻HFdCas9-TV。通过将HFdCas9-TV质粒和sgRNA质粒共转染水稻原生质体,基于 OsGW7和 OsF3H的相对表达量变化检测所构建的CRISPRa系统激活效率。结果表明,该系统可激活 OsGW7至对照组的95倍,为CCTV系统的2.2倍;可同时激活 OsGW7、 OsF3H表达量分别至对照组的33倍和26倍。该系统的建立为开发特异性更强、效率更高的植物CRISPRa系统奠定前期试验基础,为水稻及其他作物分子育种提供“多重加法”的技术方案。

关 键 词:基因激活  CRISPRa  水稻  原生质体

Optimization and Validation of Rice CRISPRa System
YANG Liu,YAO Yifei,LIU Linli,SU Yanqi and LIU Huawei.Optimization and Validation of Rice CRISPRa System[J].Acta Agriculturae Boreali-occidentalis Sinica,2023(10):1587-1593.
Authors:YANG Liu  YAO Yifei  LIU Linli  SU Yanqi and LIU Huawei
Abstract:
Keywords:Gene activation  CRISPRa  Rice  Protoplast
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