| miR-221-3p靶向BCL2L11调控小尾寒羊卵泡颗粒细胞凋亡 |
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| 引用本文： | 刘玉芳,陈玉林,周祖阳,储明星.miR-221-3p靶向BCL2L11调控小尾寒羊卵泡颗粒细胞凋亡[J].中国农业科学,2022,55(9):1868-1876. |
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| 作者姓名： | 刘玉芳 陈玉林 周祖阳 储明星 |
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| 作者单位： | 1中国农业科学院北京畜牧兽医研究所/农业农村部动物遗传育种与繁殖重点实验室,北京 1001932河北工程大学生命科学与食品工程学院,河北邯郸 056001 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金（32172704）；;河北省自然科学基金青年项目（C2019402261）；;国家肉羊产业技术体系专项（CARS-38）； |
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| 摘 要： | 【目的】BCL2L11在哺乳动物中能够促进多种细胞凋亡,同时参与繁殖性状相关组织器官的发育及疾病治疗,文章利用分子生物学方法探究miR-221-3p靶向调控BCL2L11对小尾寒羊卵泡颗粒细胞凋亡的影响,为进一步研究BCL2L11在卵泡颗粒细胞凋亡和卵泡闭锁过程中的调控作用提供依据。【方法】在前期课题组卵巢组织全转录组测序分析的基础上,获得了候选基因BCL2L11及其调控元件miR-221-3p,利用半定量和组织荧光定量（RT-qPCR）分析BCL2L11在小尾寒羊不同组织中的表达情况;通过RT-qPCR定量试验在小尾寒羊卵泡期和黄体期卵巢组织中鉴定了BCL2L11及miRNA-221-3p的表达情况;构建BCL2L11 3’UTR野生型和突变型载体,在HEK293T细胞中共转染miR-221-3p mimic和BCL2L11野生型和突变型及阴性对照,采用双荧光素酶报告基因检测系统确定miR-221-3p与BCL2L11靶向性关系;在绵羊卵巢原代颗粒细胞中转染miR-221-3p mimic及阴性对照实现miR-221-3p过表达,使用RT-qPCR技术在mRNA水平上检测miR-221-3p对BCL2L11以及卵巢颗粒细胞凋亡标志基因XIAP和Fas表达水平的影响;同时利用EdU试验分析miR-221-3p过表达和阴性对照组中颗粒细胞的增殖变化。【结果】半定量和组织RT-qPCR分析均表明BCL2L11在卵巢组织中表达量高于其他组织;RT-qPCR定量结果显示miR-221-3p和 BCL2L11在小尾寒羊卵泡期和黄体期卵巢组织中差异表达,miR-221-3p在卵泡期卵巢中的表达量高于黄体期,而BCL2L11在卵泡期卵巢中的表达量低于黄体期,表现出负调控的现象;双荧光素酶报告基因验证分析显示,过表达miR-221-3p mimic显著抑制了BCL2L11 3’UTR荧光素酶的活性（P<0.05）,阴性对照组则没有显著影响;过表达miR-221-3p,靶基因BCL2L11 mRNA表达水平显著降低,同时,卵泡颗粒细胞凋亡标志基因XIAP和Fas的表达量也显著降低（P<0.05）;EdU试验分析显示,过表达miR-221-3p的颗粒细胞增殖率为18.9%,极显著高于阴性对照组的10.43%（P<0.01）。【结论】BCL2L11和miR-221-3p是调控绵羊卵巢发育的重要基因及调控元件,BCL2L11是miR-221-3p的靶基因之一,miR-221-3p过表达可抑制颗粒细胞凋亡,该作用结果可能通过抑制靶基因BCL2L11的表达进而影响了绵羊卵巢颗粒细胞的凋亡。
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| 关 键 词： | miR-221-3p 小尾寒羊 卵巢颗粒细胞凋亡 BCL2L11 |
| 收稿时间： | 2021-03-04 |
miR-221-3p Regulates Ovarian Granulosa Cells Apoptosis by Targeting BCL2L11 in Small-Tail Han Sheep |
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| LIU YuFang,CHEN YuLin,ZHOU ZuYang,CHU MingXing.miR-221-3p Regulates Ovarian Granulosa Cells Apoptosis by Targeting BCL2L11 in Small-Tail Han Sheep[J].Scientia Agricultura Sinica,2022,55(9):1868-1876. |
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| Authors: | LIU YuFang CHEN YuLin ZHOU ZuYang CHU MingXing |
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| Institution: | 1Institute of Animal Science, Chinese Academy of Agricultural Sciences/Key Laboratory of Animal Genetics, Breeding and Reproduction, Ministry of Agriculture and Rural Affairs, Beijing 1001932College of Life Science and Food Engineering, Hebei University of Engineering, Handan 056001, Hebei |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | miR-221-3p Small-Tail Han Sheep granulosa cells apoptosis BCL2L11 |
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