| 乙型脑炎病毒EⅢ基因片段的表达与EⅢ-间接ELISA抗体检测试剂盒的研制 |
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| 引用本文： | 姚俊庸,毛晶丹,郑仲华,赵明秋,陈金顶.乙型脑炎病毒EⅢ基因片段的表达与EⅢ-间接ELISA抗体检测试剂盒的研制[J].广东畜牧兽医科技,2016(5). |
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| 作者姓名： | 姚俊庸 毛晶丹 郑仲华 赵明秋 陈金顶 |
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| 作者单位： | 华南农业大学兽医学院,广东广州,510642 |
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| 基金项目： | 广东省科技计划项目(2015B020230009;2015A050502044)，国家重点研发计划重点专项(2016YFD0500700)，国家公益性行业(农业)科研专项(201203056 |
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| 摘 要： | 为了研制乙型脑炎病毒EⅢ-间接ELISA抗体检测试剂盒,将乙型脑炎病毒EⅢ基因克隆至原核表达载体p ET-32a(+),重组质粒转化大肠杆菌BL21进行诱导表达。以纯化后的重组蛋白EⅢ包被酶标板,优化ELISA反应条件,组装试剂盒。SDS-PAGE和Western bloting分析表明,重组蛋白分子质量约为30ku,经IPTG诱导后高效表达,且具有来良好的免疫原性。优化试验确定重组抗原最佳包被浓度为4.7μg/m L,血清样本的阳性临界值为0.255。特异性试验结果表明,重组蛋白与猪瘟、猪伪狂犬、猪圆环病等多种病原体的阳性血清无交叉反应。敏感性试验结果表明,血清稀释至1∶6400时仍检测为阳性。该试剂盒的批内、批间变异系数均小于10%。用该试剂盒检测224份临床猪血清样本,并与商品化ELISA试剂盒检测结果比较,两者的符合率为90.7%。研究结果表明,原核表达的猪流行性乙型脑炎病毒EⅢ蛋白具有良好的免疫原性,研制的猪流行性乙型脑炎病毒EⅢ-间接ELISA抗体检测试剂盒敏感性、特异性和重复性较好,为猪流行性乙型脑炎的抗体水平检测、流行病学调查、类症鉴别等方面提供了重要方法。
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| 关 键 词： | 猪流行性乙型脑炎病毒 原核表达 间接ELISA |
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