| 基于Cas9-Free的拟南芥ALB3基因编辑载体构建及验证 |
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| 引用本文： | 马铭赛,布梁灏,陈自银,黄嘉玲,欧阳乐军,李莉梅,王玉涛.基于Cas9-Free的拟南芥ALB3基因编辑载体构建及验证[J].华北农学报,2020,35(1):44-50. |
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| 作者姓名： | 马铭赛 布梁灏 陈自银 黄嘉玲 欧阳乐军 李莉梅 王玉涛 |
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| 作者单位： | 喀什大学 生命与地理科学学院,新疆 喀什 844000;新疆帕米尔高原生物资源与生态重点实验室,新疆 喀什 844000;广东石油化工学院 生物与食品工程学院,广东 茂名 525000,广东石油化工学院 生物与食品工程学院,广东 茂名 525000,广东石油化工学院 生物与食品工程学院,广东 茂名 525000,广东石油化工学院 生物与食品工程学院,广东 茂名 525000,广东石油化工学院 生物与食品工程学院,广东 茂名 525000,广东石油化工学院 生物与食品工程学院,广东 茂名 525000,喀什大学 生命与地理科学学院,新疆 喀什 844000;新疆帕米尔高原生物资源与生态重点实验室,新疆 喀什 844000 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金;广东省攀登计划项目;广东省高校基础与应用基础研究重大项目;广东省自然科学基金;广东省科技计划;研究生科研创新项目;大学生创新项目;安徽师范大学培育项目 |
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| 摘 要： | 建立一种高效安全的基因定点编辑体系,为研究植物的光合作用途径以及生理代谢过程提供理想材料。针对拟南芥靶基因ALB3设计2个sgRNA,引导Cas9蛋白识别PAM位点,从而实现ALB3基因的大片段敲除;将荧光筛选标记基因mCherry组装到CRISPR/Cas9载体中,构建一种带有荧光筛选标记的CRISPR/Cas9载体;利用农杆菌转化法转化拟南芥,对其后代进行筛选验证,在倒置荧光显微镜下挑选便可获得Cas9-Free的纯合突变种子。测序结果表明,含有可视化筛选标记基因的拟南芥ALB3基因编辑载体序列与预期一致,由此证明载体构建成功;通过倒置荧光显微镜观察,发现阳性转化拟南芥T_0种子含有红色荧光标记,表观观测以及分子鉴定表明T_1植株得到纯合突变后代,条带大小小于野生型,白化突变性状明显。挑选T_1不含荧光的种子进行培育得到的T_2植株,经分子鉴定发现已成功实现Cas9-Free且植株白化。本研究成功构建了一种带有荧光筛选标记且可实现拟南芥ALB3基因敲除的CRISPR/Cas9载体,并获得Cas9-Free的纯合突变植株,为拟南芥基因高效编辑载体的构建以及Cas9-Free基因编辑后代的获得提供了借鉴与参考。
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| 关 键 词： | CRISPR/Cas9 ALB3基因 拟南芥 基因编辑 载体 |
Construction and Validation of Arabidopsis ALB3
Gene Editing Vector Based on Cas9-Free |
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| MA Mingsai,BU Lianghao,CHEN Ziyin,HUANG Jialing,OUYANG Lejun,LI Limei,WANG Yutao.Construction and Validation of Arabidopsis ALB3
Gene Editing Vector Based on Cas9-Free[J].Acta Agriculturae Boreali-Sinica,2020,35(1):44-50. |
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| Authors: | MA Mingsai BU Lianghao CHEN Ziyin HUANG Jialing OUYANG Lejun LI Limei WANG Yutao |
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