| 牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的原核表达及抗体间接ELISA检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 孙丹,黄小洁,秦义娴,高月异,孙淼,刘丹.牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的原核表达及抗体间接ELISA检测方法的建立[J].中国兽药杂志,2023,57(11):1-7. |
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| 作者姓名： | 孙丹 黄小洁 秦义娴 高月异 孙淼 刘丹 |
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| 作者单位： | 北京市兽药饲料监测中心,,,,,中国兽医药品监察所 |
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| 基金项目： | 中国兽医药品监察所兽药行业公益性重点专项“牛羊主要病原检测新技术与制品效力检验替代方法研究”（GY202103） |
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| 摘 要： | 为建立检测牛病毒性腹泻病毒抗体的间接ELISA检测方法，利用大肠杆菌表达系统成功表达E2蛋白并纯化，利用纯化后的蛋白作为包被抗原，用方阵法对影响ELISA试验的各个因素进行优化，并进行特异性、敏感性和重复性试验。确定E2抗原最佳包被浓度为1μg/mL,最佳血清稀释度为1∶40,最佳封闭液为1%明胶，最佳血清作用方式为37℃作用30 min,酶标抗体的最佳作用方式为1∶2000稀释、37℃作用30 min;最佳底物作用时间为室温20 min,阳性临界值为OD450nm≥0.255。与血清中和试验和商品化试剂盒进行比较，总符合率分别为98%和96%,批内和批间重复性试验的变异系数均小于10%。该方法与其它常见牛病毒阳性血清均无交叉反应。本研究成功建立了间接ELISA方法，为进一步用于大批量牛血清样本的抗体检测和流行病学研究奠定了基础。
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| 关 键 词： | 牛病毒性腹泻病毒 E2蛋白 原核表达 间接ELISA方法 |
| 收稿时间： | 2023/5/19 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2023/10/20 0:00:00 |
E.coli Expression of Bovine Viral Diarrhea Virus E2 Protein and Establishment of Indirect ELISA Method for Antibody Detection |
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| Institution: | Beijing veterinary drug and feed monitoring center,,,,, |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | bovine viral diarrhea virus E2 protein E coli expression indirect ELISA |
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