| 猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因的克隆与原核表达 |
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| 引用本文： | 梁望旺,伍锐,杨克礼,刘泽文,熊忠良,段正赢,邓均华,唐文娟,余爱冬,徐涤平.猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因的克隆与原核表达[J].湖北农业科学,2009,48(5). |
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| 作者姓名： | 梁望旺 伍锐 杨克礼 刘泽文 熊忠良 段正赢 邓均华 唐文娟 余爱冬 徐涤平 |
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| 作者单位： | 1. 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所,武汉,430064
2. 湖北工业大学生物工程学院,武汉,430068 |
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| 基金项目： | 国家科技支撑计划，湖北省农业科技创新中心资助项目 |
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| 摘 要： | 采用RT-PCR方法扩增了猪繁殖与呼吸综合征病毒临床分离株(HBKM2)的ORF5全基因,并进行了测序分析,根据0RF5的结构特点,进一步扩增了截去N端信号肽序列的ORF5(nsORF5),并将其克隆到pGEX-KG原核表达载体,构建了重组质粒pKG-ns5,经酶切和测序鉴定后,转化到大肠杆菌BL21(DE3)进行IPTG诱导表达,经SDS-PAGE和Western-blot分析表明,克隆的nsORF5基因与谷胱甘肽转移酶(GST)基因获得了高效融合表达,表达的融合蛋白GST-nsGP5分子量约为43kD,并具有反应活性,这为进一步研究PRRSV GP5蛋白的功能及新型疫苗、血清学诊断方法的研制奠定了基础.
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| 关 键 词： | 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 囊膜糖蛋白(GP5) 克隆 原核表达 |
Cloning and Prokaryotic Expression of ORF5 Gene of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus |
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| LIANG Wang-wang,WU Rui,YANG Ke-li,LIU Ze-wen,XIONG Zhong-liang,DUAN Zheng-ying,DENG Jun-hua,TANG Wen-juan,YU Ai-dong,XU Di-ping.Cloning and Prokaryotic Expression of ORF5 Gene of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus[J].Hubei Agricultural Sciences,2009,48(5). |
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| Authors: | LIANG Wang-wang WU Rui YANG Ke-li LIU Ze-wen XIONG Zhong-liang DUAN Zheng-ying DENG Jun-hua TANG Wen-juan YU Ai-dong XU Di-ping |
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| Institution: | 1.Institute of Animal Husbandry and Veterinary;Hubei Academy of Agricultural Science;Wuhan 430064;China;2.College of Biological Engineering;Hubei University of Technology;Wuhan 430068;China |
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| Abstract: | The Open Reading Frame 5(ORF5) of porcine reproductive and respiratory syndrome virus(PRRSV) was cloned from PRRSV HBKM2 isolate.The cDNA of ORF5 was sequenced and analyzed.According to the construction features of ORF5,the signal peptide of ORF5 gene was removed.The modified fragment of ORF5 gene was fused with GST to con-struct prokaryotic expression plasmid pKG-ORF5.After induction by IPTG,a high expression of fusion protein was obtained.SDS-PAGE analysis and Western-blot showed that the fusion protein w... |
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