| 猪2型圆环病毒ORF1基因的克隆及表达 |
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| 引用本文： | 蒋智勇,宋长绪,高向阳,王贵平,赵亚华.猪2型圆环病毒ORF1基因的克隆及表达[J].中国兽医科技,2004,34(5):3-7. |
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| 作者姓名： | 蒋智勇 宋长绪 高向阳 王贵平 赵亚华 |
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| 作者单位： | [1]广东省农业科学院兽医研究所，广东广州510640 [2]华南农业大学生命科学学院，广东广州510642 |
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| 摘 要： | 根据GenBank中猪圆环病毒2型(PCV-2)的ORF1基因序列，设计合成了1对引物，对PCV-2广东株(GD)ORF1基因进行PCR扩增，将扩增的ORF1基因克隆入pMD18～T载体，获得的重组质粒命名为pMD-ORF1。将ORF1的Kpn Ⅰ和Xba Ⅰ双酶切产物插入原核表达载体pBAD／gⅢ C得到重组子，命名为pBAD／gⅢ—ORF1。序列分析表明，克隆的ORF1与德国分离株AF201897核苷酸序列的同源性高达99．5％；与其他PCV-2株的核苷酸序列同源性为92．1％～99．9％，推导的氨基酸序列同源性为90．2％～99．5％。同时，测序结果表明，克隆的ORF1准确插入了pBAD／gⅢC的多克隆位点，未改变读码框。用L-阿拉伯糖诱导表达，收集菌液进行SDS-PAGE和Western—blotting分析，结果表明PCV-2ORF1在pBAD／gⅢC中获得了高效融合表达，其表达蛋白的分子质量约为41ku。
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| 关 键 词： | 猪2型圆环病毒 ORF1基因 克隆 表达 蛋白 分子质量 |
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