| 核桃JrTT1-1启动子不同长度片段响应干旱的活性分析 |
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| 引用本文： | 谢牧洪,李文凯,张昭龙,崔茂凯,王艺,孙雅薇,杨桂燕.核桃JrTT1-1启动子不同长度片段响应干旱的活性分析[J].北京林业大学学报,2022,44(8):31-38. |
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| 作者姓名： | 谢牧洪 李文凯 张昭龙 崔茂凯 王艺 孙雅薇 杨桂燕 |
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| 作者单位： | 西北农林科技大学林学院，陕西省核桃工程技术研究中心，陕西 杨凌 712100 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目（32171804、31800510），西北农林科技大学卓越农林创新实验计划项目（2018011117） |
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| 摘 要： | 目的 TTl是C2H2-ZFP（WIP型锌指结构）类转录因子调控蛋白，核桃JrTT1-1基因启动子含有干旱响应元件，具有调控干旱胁迫的功能。本研究通过分离JrTT1-1基因不同长度启动子片段并对其受干旱胁迫后的表达活性进行分析，探讨JrTT1-1基因响应干旱胁迫的机制。 方法 根据WRKY顺式作用元件的分布，将JrTT1-1基因启动子分为1 002 bp（?1 ~ ?1 002）、720 bp（?1 ~ ?720）、448 bp（?1 ~ ?448）、174 bp（?1 ~ ?174）、149 bp（?1 ~ ?149）5个片段，分别记为S1、S2、S3、S4、S5。用S1、S2、S3、S4、S5分别替换pCAMBIA1301载体的CaMV35S启动子构建重组载体，通过农杆菌介导的蘸花法转化拟南芥，经潮霉素筛选、PCR验证及GUS基因表达分析确定后培养至T3代。对不同生长期不同组织进行GUS酶活性测定，评价不同片段的时空表达活性。将S1、S2、S3、S4、S5转基因植株种子萌发生长30 d进行干旱处理（50 mmol/L甘露醇），未干旱处理的设为对照（CK），分析整株、根及地上部分GUS酶活性，评价不同片段响应干旱的差异。 结果 正常生长条件下，S1、S2、S3、S4、S5转基因拟南芥在不同生长时期、不同组织器官中均能检测出GUS酶活性，但不同片段GUS活性具有差异，且随着片段变短，活性降低；但S1和S2之间的差异不显著。比较成熟种子、鲜种子、35 d根、茎、叶、花的GUS活性，发现不同组织之间也有区别，体现了5个片段的组织表达特异性。与CK相比，干旱胁迫下，5个片段整株、根和地上部分的GUS活性均显著提高，其中干旱胁迫后S1、S2、S3、S4、S5全株的GUS活性分别为CK的1.50、1.46、1.47、1.46、2.23倍，根GUS活性分别为CK的1.29、1.29、1.28、1.53、1.36倍，地上部分GUS活性分别为CK的1.62、1.59、1.57、1.59、2.30倍。 结论 JrTT1-1基因启动子片段的表达活性与其长度呈正相关，每个长度启动子片段活性具有根、茎、叶、花、种子等组织特异性；WRKY元件及其数量可能与干旱胁迫调节作用相关，且JrTT1-1启动子在干旱胁迫下的表达也具有组织差异性。
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| 关 键 词： | 核桃 JrTT1-1基因 启动子 GUS活性 干旱胁迫 |
| 收稿时间： | 2021-04-02 |
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