| 非洲猪瘟病毒无标签p35蛋白的制备及间接ELISA抗体检测方法的建立 |
| |
| 引用本文： | 吴植,卢会鹏,王安平,谢军,曹世诺,徐艳,朱善元.非洲猪瘟病毒无标签p35蛋白的制备及间接ELISA抗体检测方法的建立[J].江苏农业学报,2023(5):1209-1216. |
| |
| 作者姓名： | 吴植 卢会鹏 王安平 谢军 曹世诺 徐艳 朱善元 |
| |
| 作者单位： | 江苏农牧科技职业学院/江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室/江苏现代畜牧与新兽药工程技术中心 |
| |
| 摘 要： | 为了进一步提高非洲猪瘟病毒(ASFV)间接酶联免疫吸附试验(ELISA)抗体检测方法的特异性，本研究构建了类弹性蛋白(ELP)标签与ASFV p35融合表达载体，利用相变循环分离纯化融合蛋白后，用烟草蚀纹病毒蛋白酶(TEVP)切除ELP标签，制备获得无标签p35蛋白，以此为包被抗原，通过一系列的条件摸索和优化，建立ASFV间接ELISA抗体检测方法。结果显示，ELP-p35融合蛋白的相对分子质量大小约为80 000;制备获得的无标签p35蛋白能够被非洲猪瘟阳性血清所识别；抗原包被最佳质量浓度为2.00μg/ml,待检血清最佳稀释比例为1∶200,二抗最佳稀释比例为1∶10 000,阴性和阳性判定阈值OD450为0.171;与口蹄疫病毒(FMDV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)和伪狂犬病毒(PRV)等阳性血清无交叉反应，特异性好；批内、批间试验结果显示变异系数都小于5.000%,重复性好；可检测400倍稀释的血清，敏感性较高；与商品化检测试剂盒(ING)检测结果的符合率高达100%。结果表明，用本研究制备的A...
|
| 关 键 词： | 非洲猪瘟 类弹性蛋白 无标签p35蛋白 间接ELISA方法 |
|
|
