| 慢病毒介导的小鼠生长抑素shRNA序列的设计和筛选 |
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| 引用本文： | 郝林琳,于浩,李莉,王博,王佳,刘松财,张永亮.慢病毒介导的小鼠生长抑素shRNA序列的设计和筛选[J].中国兽医学报,2011,31(1). |
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| 作者姓名： | 郝林琳 于浩 李莉 王博 王佳 刘松财 张永亮 |
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| 作者单位： | 1. 吉林大学,畜牧兽医学院,吉林长春,130062
2. 吉林大学,畜牧兽医学院,吉林长春,130062;华南农业大学,动物科学学院,广东,广州,510643 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(30771572),国家自然科学基金联合基金资助项目(u0731004) |
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| 摘 要： | 生长抑素(SS)是一种多功能的脑肠肽,在动物生长轴中主要作为生长激素(GH)的负性调控因子。本研究通过慢病毒表达质粒介导shRNA,瞬时转染自身表达SS的BHK-21细胞,筛选出了靶向小鼠SS的最有效的siRNA序列。首先,分别在小鼠SS基因mRNA的246、433和539bp处找到潜在靶位点,合成3条siRNA转录模板的发夹结构以及1条阴性对照,体外退火后插入pshRNA-copGFP lentivector构建重组质粒。然后,通过对转染BHK-21细胞的荧光观察、Real-time PCR、免疫组化以及RIA等检测,转染细胞SS在mRNA水平及蛋白水平均检测到不同程度的抑制(P<0.05)。其中,psh2(SS 433～451)表现出了最高的沉默效率(转染效率68.9%时,mRNA水平的沉默效率达59.3%,P<0.05;蛋白质水平的沉默效率达55.6%,P<0.05)。本研究为降低SS在动物体内的分泌,相应提高GH的浓度,进而为促进动物生长的研究奠定了基础。
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| 关 键 词： | 生长抑素 慢病毒载体 shRNA |
Design and screening of lentiviral-mediated shRNA sequences targeting mouse somatostatin |
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| HAO Lin-lin,YU Hao,LI Li,WANG Bo,WANG Jia,LIU Song-cai,ZHANG Yong-liang.Design and screening of lentiviral-mediated shRNA sequences targeting mouse somatostatin[J].Chinese Journal of Veterinary Science,2011,31(1). |
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| Authors: | HAO Lin-lin YU Hao LI Li WANG Bo WANG Jia LIU Song-cai ZHANG Yong-liang |
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| Institution: | HAO Lin-lin1,YU Hao1,LI Li1,WANG Bo1,WANG Jia1,LIU Song-cai1,ZHANG Yong-liang1,2(1.College of Animal Science and Veterinary Medicine,Jilin University,Changchun 130062,China,2.College of Animal Science,South China Agricultural University,Guangzhou 510643,China) |
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| Abstract: | As a multifunctional braingut petide,Somatostatin(SS) is an important negative regulator of Growth hormone(GH) in the GH-IGF-1 growth axis.In this study,we screened the best siRNA sequence targeting mouse SS by the transient-transfection of the lentiviral mediated shRNA into BHK-21 cells which secrete SS themselves.First,three potential sites in mouse SS mRNA sequence(start from 246,433,539 bp,seperately) were selected and synthesized,as well as one negative shRNA.After annealing in vitro,four of pshRNA-cop... |
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| Keywords: | somatostatin lentiviral vector shRNA |
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