| 牛Th1/Th2型细胞因子实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用 |
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| 引用本文： | 韩猛立,蔡日鹏,黄新,何延华,薄新文,钟发刚.牛Th1/Th2型细胞因子实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用[J].中国兽医学报,2011,31(4). |
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| 作者姓名： | 韩猛立 蔡日鹏 黄新 何延华 薄新文 钟发刚 |
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| 作者单位： | 1. 新疆生产建设兵团绵羊繁育生物技术重点实验室,新疆石河子832000;石河子大学动物科技学院,新疆石河子832003
2. 新疆生产建设兵团绵羊繁育生物技术重点实验室,新疆石河子,832000 |
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| 基金项目： | 国家“973”计划资助项目(2008CB117017); 国家自然科学基金资助项目(30960286); 兵团博士基金资助项目(2007JC15) |
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| 摘 要： | 根据GenBank中牛Th1/Th2(BoTNF-α、BoIFN-γ、BoIL-2、BoIL-4、BoIL-6、BoIL-8、BoIL-10)型细胞因子的基因序列,在保守区设计并合成各自特异引物,并以牛3-磷酸甘油脱氢酶(GAPDH)基因为内参,采用SYBR GreenⅠ染料以建立实时荧光定量PCR检测方法。将Th1/Th2型细胞因子基因克隆至pMD18-T载体上,转化大肠杆菌DH5α,经PCR及测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为标准品模板建立SYBR-GreenⅠ荧光定量RT-PCR标准曲线和溶解曲线,并做灵敏性、特异性和重复性试验。对建立的Th1/Th2型细胞因子SYBR-GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR方法进行分析,结果表明牛IFN-α、IFN-β、IFN-γ和GAPDH基因的Ct值与标准品稀释度在1×101～1×108 copies/μL范围分别呈良好的线性关系,相关系数均大于0.991。溶解曲线分析表明产物为特异的单峰,具有较高的灵敏性和特异性,重复性较好。建立了检测Th1/Th2型细胞因子的实时荧光定量RT-PCR方法,为在mR-NA水平对牛Th1/Th2型细胞因子的定量分析奠定了基础。
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| 关 键 词： | 牛 Thl/Th2型细胞因子 外周血单个核细胞 实时荧光定量RT-PCR SYBR GreenⅠ |
Establishment and application of a real-time fluorescent quantitative RT-PCR assay for detection of bovine Th1/Th2 cytokines |
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| HAN Meng-li,CAI Yue-peng,HUANG Xin,HE Yan-hua,BO Xin-weng,ZHONG Fa-gang.Establishment and application of a real-time fluorescent quantitative RT-PCR assay for detection of bovine Th1/Th2 cytokines[J].Chinese Journal of Veterinary Science,2011,31(4). |
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| Authors: | HAN Meng-li CAI Yue-peng HUANG Xin HE Yan-hua BO Xin-weng ZHONG Fa-gang |
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| Institution: | HAN Meng-li1,2,CAI Yue-peng1,HUANG Xin1,HE Yan-hua1,BO Xin-weng1,ZHONG Fa-gang1*(1.Key Laboratory of Sheep Breeding and Development Technology of Xinjiang Production & Construction Corps,Shihezi,Xinjiang 832000,China,2.College of Animal Science and Technology,Shihezi University,China) |
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| Abstract: | |
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