| 猪繁殖与呼吸综合征病毒HBKM2株ORF7基因的克隆、序列分析及原核表达 |
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| 引用本文： | 梁望旺,熊忠良,刘泽文,杨克礼,伍锐,邓均华,段正赢,余爱冬,唐文娟,徐涤平.猪繁殖与呼吸综合征病毒HBKM2株ORF7基因的克隆、序列分析及原核表达[J].安徽农业科学,2009,37(35):17406-17408. |
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| 作者姓名： | 梁望旺 熊忠良 刘泽文 杨克礼 伍锐 邓均华 段正赢 余爱冬 唐文娟 徐涤平 |
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| 作者单位： | 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所,湖北武汉,430064;湖北工业大学生物工程学院,湖北武汉,430068 |
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| 基金项目： | 国家科技支撑计划，湖北省自然科学基金项目，湖北省农业科技创新中心资助项目 |
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| 摘 要： | 目的]对猪繁殖与呼吸综合征病毒HBKM2毒株核蛋白编码基因ORF7进行研究，为进一步了解其编码蛋白的功能和研制新的血清学诊断方法奠定基础。方法]采用RT—PCR方法扩增HBKM2株的DR胛基因，然后利用DNAStar软件包对克隆的序列进行序列分析，将ORF7基因克隆到大肠杆菌原核表达载体pGEX—KG上，构建重组表达质粒pKG—N。将重组质粒转化到大肠杆菌B121。并经IPTG诱导表达，最后利用Western-blot对表达蛋白的免疫反应活性进行鉴定。结果]HBKM2毒株的0R刀基因长约372bp；序列分析表明与高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒的同源性达99％以上；SDS—PAGE表明克隆的0R几基因在大肠杆菌中获得了高效融合表达：Western-blot分析表明，重组蛋白GST—N能够与PRRSV高免猪血清发生特异性的免疫反应。结论]成功地扩增了ORF7基因。且GST-N融合蛋白能在大肠杆菌中高效表达。
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| 关 键 词： | 猪繁殖与呼吸综合症病毒 核衣壳蛋白 ORF7基因 克隆 原核表达 |
Cloning,Sequence Analysis and Prokaryotic Expression of ORF7 Gene of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus Strain-HBKM2 |
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| LIANG Wang-wang et al.Cloning,Sequence Analysis and Prokaryotic Expression of ORF7 Gene of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus Strain-HBKM2[J].Journal of Anhui Agricultural Sciences,2009,37(35):17406-17408. |
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| Authors: | LIANG Wang-wang |
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| Institution: | LIANG Wang-wang et al (Institute of Animal Husb,ry , Veterinary,Hubei Academy of Agricultural Science,Wuhan,Hubei 430064) |
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| Abstract: | Objective] The foundation of the further understanding of the function of encoding protein and the development of new serological diagnostic method of porcine reproductive and respiratory syndrome virus was laid through the study on the ORF7 Gene of porcine reproductive and respiratory syndrome virus strain-HBKM2.Method] The ORF7 gene of strain HBKM2 was amplified with the method of RT-PCR and then the cloned sequence was analyzed with DNA Star software.The ORF7 gene was cloned into E.coli pGEX-KG vector ... |
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| Keywords: | Porcine reproductive and respiratory syndrome virus Nucleocapsid protein ORF7 gene Cloning Prokaryotic expression |
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