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牛冠状病毒RT-PCR检测方法的建立及应用
引用本文:何琪富,郭紫晶,李然,周军,岳华,张斌,汤承.牛冠状病毒RT-PCR检测方法的建立及应用[J].畜牧兽医学报,2018(10).
作者姓名:何琪富  郭紫晶  李然  周军  岳华  张斌  汤承
作者单位:西南民族大学生命科学与技术学院;国家民委青藏高原动物疫病防控创新团队
摘    要:本试验的目的是建立更加灵敏的检测牛冠状病毒(BCoV)的RT-PCR方法,并对川西北草原牦牛病料进行BCoV病原检测。选择BCoV聚合酶基因Nsp7-Nsp9片段设计引物,通过反应条件和体系优化,建立检测BCoV的RT-PCR方法并应用于临床样本检测。结果显示:所建方法特异性和重复性好,灵敏性达到1×10-2pg·μL-1;该方法对肉牛和牦牛BCoV都有良好的检测效果,优于比较的两种以BCoV N基因为靶点的RT-PCR方法;对2016年采集的川西北草原牦牛病料进行了BCoV的检测,结果显示:125份腹泻牦牛粪便样本中BCoV的检出率为71.20%,98份患呼吸道疾病的牦牛鼻腔棉拭子中BCoV的检出率为72.45%。此次建立的BCoV RT-PCR检测方法特异性和重复性好、灵敏度高;BCoV是当前川西北草原牦牛腹泻和呼吸道疾病综合征的重要病原。

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