| 猴源cathepsin基因shRNA文库及其稳定敲减细胞系的构建 |
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| 引用本文： | 魏宇双,刘姣扬,韩莹倩,郭珍珍,刘晓贺,巴根,韩立强,王江,褚贝贝,杨国宇.猴源cathepsin基因shRNA文库及其稳定敲减细胞系的构建[J].畜牧兽医学报,2018(6). |
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| 作者姓名： | 魏宇双 刘姣扬 韩莹倩 郭珍珍 刘晓贺 巴根 韩立强 王江 褚贝贝 杨国宇 |
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| 作者单位： | 河南农业大学农业部动物生化与营养重点开放实验室 |
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| 摘 要： | 目前关于组织蛋白酶(cathepsin)在猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)生活周期中发挥功能的研究较少。为了探究宿主细胞中cathepsin在PRRSV吸附、入侵、脱壳、生物合成、组装以及释放过程中的作用,选取源于MA-104的非洲绿猴胚胎肾上皮细胞Marc145细胞系(对PRRSV易感);利用RNAi原理,构建了以pLKO.1为载体的cathepsin基因shRNA文库;并用puromycin筛选出稳定敲减cathepsin的细胞株。结果显示:本试验构建的cathepsin-shRNA文库包含45个克隆,涉及15种cathepsin基因,筛选出的稳定细胞株中相应cathepsin基因mRNA的表达量均有显著下降。这些细胞株的构建为进一步研究cathepsin在PRRSV生活周期中发挥的重要功能奠定了基础。
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