| 细粒棘球蚴EG19抗原基因的克隆表达及重组蛋白反应原性研究 |
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| 引用本文： | 陈英,乔军,孟庆玲,钟文强,刘田莉,贡莎莎,王熙凤,黄运福,才学鹏.细粒棘球蚴EG19抗原基因的克隆表达及重组蛋白反应原性研究[J].畜牧与兽医,2018(3):63-67. |
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| 作者姓名： | 陈英 乔军 孟庆玲 钟文强 刘田莉 贡莎莎 王熙凤 黄运福 才学鹏 |
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| 作者单位： | 石河子大学动物科技学院;中国农业科学院兰州兽医研究所; |
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| 摘 要： | 为研究细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus,Eg)中的原头蚴特异性抗原Eg19蛋白的反应原性,根据Gen Bank中Eg19抗原基因c DNA序列设计特异性引物,以Eg头节总RNA为模板,进行RT-PCR扩增,将PCR产物克隆到p MD19-T载体,测序验证后,将Eg19抗原基因亚克隆至表达载体p ET-32a中,构建p ET-Eg19原核表达载体,将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,用IPTG进行诱导表达,并对表达的蛋白进行纯化及反应原性分析。结果 Eg19 c DNA全长534个核苷酸,编码177个氨基酸,等电点为4.54。该多肽含有2个N端酰基化位点,1个PKC磷酸化位点,1个CKⅡ磷酸化位点,1个ATP/GTP结合位点基序A(P-loop);抗原表位区集中在20~93、96~146位;为亲水性蛋白。SDS-PAGE可以检测到35 k Da的蛋白特异性条带;Western blot结果显示,表达的重组蛋白Eg19抗原能与Eg阳性血清发生特异性反应,具有较强的反应原性,为进一步利用Eg19抗原蛋白作为Eg感染诊断中的候选抗原奠定了前期基础。
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| 关 键 词： | 细粒棘球蚴 Eg19抗原基因 克隆 表达 反应原性 |
Cloning and expression of EG19 gene of Echinococcus granulosus and reactionogenicity of recombinant protein |
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