| 杧果露水斑病病原菌枝状枝孢霉的巢氏PCR检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 刘晓妹,杨永利,杨石有,张贺,朱朝华,蒲金基.杧果露水斑病病原菌枝状枝孢霉的巢氏PCR检测方法的建立[J].果树学报,2019(1). |
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| 作者姓名： | 刘晓妹 杨永利 杨石有 张贺 朱朝华 蒲金基 |
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| 作者单位： | 海南大学热带农林学院·热带农林生物灾害绿色防控教育部重点实验室;中国热带农业科学院环境与植物保护研究所·农业部热带作物有害生物综合治理重点实验室 |
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| 摘 要： | 【目的】杧果露水斑病是当前生产上影响杧果产业的重要病害之一,因潜伏期长常在发病初期不易被察觉而错过防治适期,建立其主要致病菌Cladosporium cladosporioides的快速准确检测方法,对于该病的早期诊断和及时防控尤为重要。【方法】将该病菌的ITS序列与NCBI中的数据大量比对后,在差异位点大的区域设计了8对引物,通过筛选获得两对特异性良好的引物及其扩增条件。【结果】两对特异性引物分别是ML-SF9/ML-SR5和ML-SF10/ML-SR10,扩增条件:94℃4 min;94℃45 s,65℃45 s,72℃1 min,36周;72℃10 min,特异条带大小分别为408 bp和424 bp。为了提高检测的灵敏度,又与真菌通用引物ITS1/ITS4结合后,建立了杧果露水斑病病原菌的两套巢式PCR快速检测体系,可检测病菌DNA的含量最低为3.55×10-9ng·μL-1,比常规PCR灵敏度提高了1万倍,且能实现对潜伏期果实的特异性检测。【结论】此技术操作简单、特异性强、灵敏度高,为杧果露水斑病的早期诊断提供了新方法。
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| 关 键 词： | 杧果 露水斑病菌 常规PCR 巢式PCR 分子检测 |
Development of a nested PCR detection method for Cladosporium cladosporioides causing mango sooty blotch disease |
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