| BVDV、BCV和BRV三重RT-PCR检测方法的建立及应用 |
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| 引用本文： | 林初文,沈志强.BVDV、BCV和BRV三重RT-PCR检测方法的建立及应用[J].畜牧与兽医,2013,45(7). |
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| 作者姓名： | 林初文 沈志强 |
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| 作者单位： | 山东省滨州畜牧兽医研究院,山东滨州256600;山东绿都生物科技有限公司,山东滨州256600 |
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| 基金项目： | 山东省自主创新成果转化重大专项项目 |
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| 摘 要： | 根椐GenBank中已发表的牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)、牛冠状病毒(bovine coronavirus,BCV)和牛轮状病毒(bovine rotavirus,BRV)3种病毒基因序列,设计引物。在建立各病毒单项RT-PCR技术的基础上,优化三重RT-PCR反应条件,建立了3种病毒的三重RT-PCR技术,用这3对引物对同一样品中的BVDV、BCV、BRV核酸模板进行三重RT-PCR扩增,结果可同时扩增BVDV的466 bp,BCV的685 bp,BRV的247 bp的特异性片段,而对猪瘟病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛呼吸道合胞体病毒和牛副流感病毒3型扩增结果均为阴性。敏感性测定表明,该三重RT-PCR技术能检出10 pg的BVDV、1 pg的BRV和10 pg的BCV模板。用45份临床病料对本研究多重RT-PCR技术和单项RT-PCR技术进行对比验证,显示两者的总符合率为100%。表明建立的多重RT-PCR检测方法具有特异、快速、准确的特点,可用于对这3种病毒的同时检测和鉴别诊断。
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| 关 键 词： | 三重RT-PCR 牛病毒性腹泻病毒 牛冠状病毒 牛轮状病毒 |
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