| 小麦热激蛋白60(HSP60)基因的克隆与原核表达 |
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| 引用本文： | 李芳芳,刘国富,王媛媛,曹雪松.小麦热激蛋白60(HSP60)基因的克隆与原核表达[J].安徽农业科学,2010,38(6):2803-2805. |
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| 作者姓名： | 李芳芳 刘国富 王媛媛 曹雪松 |
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| 作者单位： | 聊城大学生命科学学院,山东聊城,252059;聊城大学生命科学学院,山东聊城,252059;聊城大学生命科学学院,山东聊城,252059;聊城大学生命科学学院,山东聊城,252059 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(30870109)资助 |
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| 摘 要： | 目的]构建小麦热激蛋白60基因的原核表达载体,并在E.coli中进行高效表达。方法]根据GenBank中收录的小麦热激蛋白60基因序列设计合成1对引物P1/P2,利用RT-PCR方法从小麦RNA中扩增小麦HSP60基因,应用基因重组技术构建pGEX-4T-1-HSP60表达载体,将构建好的小麦HSP60基因原核表达载体pGEX-4T-1-HSP60转化至大肠杆菌表达菌株E.coli-BL21感受态细胞。结果]对重组质粒进行酶切分析及序列测定鉴定正确后,与GenBank中收录的小麦HSP60基因序列比对分析,同源性达100%。在IPTG诱导下获得了目的蛋白,所表达的GST-HSP60融合蛋白分子量约为90 KD。蛋白质电泳（SDS-PAGE）结果表明,表达的蛋白条带与预期的大小一致。结论]成功构建了pGEX-4T-1-HSP60的原核表达载体,在E.coli-BL21中高效表达了HSP60蛋白,为进一步研究该蛋白的功能及其作用机制奠定了基础。
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| 关 键 词： | HSP60 基因克隆 原核表达 |
Gene Cloning and Prokaryotic Expression of the Wheat Heat-shock Protein 60 (HSP60) |
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| LI Fang-fang et al.Gene Cloning and Prokaryotic Expression of the Wheat Heat-shock Protein 60 (HSP60)[J].Journal of Anhui Agricultural Sciences,2010,38(6):2803-2805. |
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| Authors: | LI Fang-fang |
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| Institution: | College of Life Science;Liaocheng University;Liaocheng;Shandong 252095 |
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| Abstract: | Objective] The aim was to construct the wheat heat-shock protein 60(HSP60) gene in prokaryotic expression vector and express HSP60 efficiently in E.coli.Method]According to the wheat HSP60 gene sequence in the GenBank,a pair of primers P1/P2 were designed and synthesized.The wheat HSP60 gene fragment was amplified from the wheat RNA by RT-PCR and inserted into bacterial expression vector of pGEX-4T-1.The construct of pGEX-4T-1-HSP60 was subsequently transformed into E.coli-BL21.Result]The construct of pG... |
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| Keywords: | HSP60 Gene cloning Prokaryotic expression |
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