摘 要: | 目的]优化适合柑橘的SCoT反应体系,并利用优化的SCoT体系分析无籽沙糖橘和有籽沙糖橘的遗传多样性。方法]采用正交设计方法分别对反应体系中DNA模板、Mg~(2+)、引物、dNTPs、Taq DNA聚合酶的浓度等进行优化。利用优化的体系,选用60条SCoT引物对有籽沙糖橘和无籽沙糖橘进行扩增,扩增出有差异条带进行SCAR转化。结果]优化的柑橘ScoT反应体系为:Mg~(2+)1.5 mmol/L,dNTPs0.35 mmol/L,引物0.25μmol/L,Taq酶0.5 U,模板DNA 30 ng,总反应体系为20μl。最适退火温度为50.6℃。利用优化的体系,选用60条SCoT引物对有籽沙糖橘和无籽沙糖橘进行分析,经过引物筛选,获得了较好扩增的SCoT引物共42条,通过42条SCoT引物对有籽沙糖橘和无籽沙糖橘的筛选,获得了1条有差异条带引物。结论]有籽沙糖橘和无籽沙糖橘基因组水平上存在差异。
|