| 旱柳SRAP－PCR体系的建立与优化 |
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| 引用本文： | 王红玲,张珏,教忠意,隋德宗.旱柳SRAP－PCR体系的建立与优化[J].浙江林学院学报,2010,27(6):945-949. |
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| 作者姓名： | 王红玲 张珏 教忠意 隋德宗 |
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| 作者单位： | 江苏省林业科学研究院,江苏南京,211153 |
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| 基金项目： | 十一五国家科技支撑计划项目 |
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| 摘 要： | 为了丰富柳树分子标记的手段，以旱柳Salix matsudana为材料，通过正交实验设计法，获得适于旱柳的相关序列扩增多态性（sequence-related amplified polymorphism，SRAP）-聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）体系；对SRAP-PCR扩增过程中的2次退火温度进行优化。结果如下：优化反应体系，25.00 μL反应液中，含20.84 nkat的Taq酶，2.00 μL Mg2+（25 .00 mmol·L－1），2.50 μL 碱基混合物（脱氧核糖核苷酸dNTPs，各2.50 mmol·L－1），1.50 μL引物（20.00 μmol·L－1），100.00 ng DNA模板，2.50 μL 10 × Taq酶缓冲液。扩增程序，94 ℃ 2.0 min；94 ℃ 1.0 min，38 ℃ 1.0 min，72 ℃ 1.5 min，5个循环；94 ℃ 1.0min，54 ℃ 1.0 min，72 ℃ 1.5 min，30个循环；72 ℃ 10.0 min。经聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）检测，特征性条带清晰，信息量大，完全可以用于旱柳基因组的研究分析。图4表2参12
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| 关 键 词： | 林木育种学 旱柳 相关序列扩增多态性（SRAP） 正交实验设计 |
Establishing and optimizing the SRAP-PCR system for Salix matsudana |
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| WANG Hong-ling,ZHANG Jue,JIAO Zhong-yi,SHI De-zong.Establishing and optimizing the SRAP-PCR system for Salix matsudana[J].Journal of Zhejiang Forestry College,2010,27(6):945-949. |
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| Authors: | WANG Hong-ling ZHANG Jue JIAO Zhong-yi SHI De-zong |
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| Institution: | WANG Hong-ling,ZHANG Jue,JIAO Zhong-yi,SHI De-zong (Forest Research Institute of Jiangsu Province,Nanjing 211153,Jiangsu,China) |
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| Abstract: | To enrich the molecular marker method for willow trees,an improved reaction system from a sequence-related amplified polymorphism-polymerase chain reaction （SRAP-PCR） of Salix matsudana（Hankow willow） was obtained with an orthogonal design.In addition,the temperatures for two annealing methods were optimized in the PCR amplifier and a polyacrylamide gel electrophoresis （PAGE） was employed.Results showed that the reaction system was 20.84 nkat Taq,2.00 μL Mg2＋（25.00 mmol·L-1）,2.50 μL deoxyribonucleotide triphosphates （dNTPs）（2.50 mmol·L-1 each）,1.50 μL primer（20.00 μmol·L-1）,100.00 ng template,and 2.50 μL 10 × Taq buffer in 25.00 μL.The program was as follows：94 ℃ for 2.0 min;then,for 5 cycles,94 ℃ for 1.0 min,38 ℃ for 1.0 min,and 72 ℃ for 1.5 min;next,at 30 cycles,94 ℃ for 1.0 min,54 ℃ for 1.0 min,and 72 ℃ for 1.5 min;and finally 72 ℃ for 10.0 min.Results of PAGE showed that clarity and amount of information increased with the new procedure.Thus,this superior method could be used for research on S.matsudana. |
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| Keywords: | forest tree breeding Salix matsudana SRAP orthogonal design |
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